Prohibitin对雌激素受体阳性乳腺癌中雄激素受体表达调控的研究

发布时间：2020-07-09 15:23

【摘要】：研究背景:乳腺癌是我国女性最常见肿瘤,ER阳性乳腺癌内分泌治疗抵抗是严峻的临床课题。Prohibitin(PHB)是一种在正常和癌细胞中具有多种功能的进化保守蛋白,PHB在癌细胞中的作用尚有争议。AR在乳腺癌中高表达,且在ER阳性和ER阴性乳腺癌中所起作用不同。在前列腺癌细胞中,PHB显示出抑制AR活性。在ER阳性乳腺癌细胞中,PHB能否调节AR的表达我们还无从知晓,目前国内外未见相关文献报道。研究目的:明确PHB表达在乳腺癌生存预后中的作用,进一步明确PHB对ER阳性乳腺癌中AR表达的调控。研究方法:我们首先用免疫组化法检测121例乳腺癌患者肿瘤组织和相应的癌旁正常乳腺组织中PHB和AR的蛋白表达,分析它们的表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性以及二者之间的相关性。为研究PHB和AR在ER阳性乳腺癌患者临床结局中的作用,我们用Kaplan-Meier plotter在线乳腺癌生存分析数据库,进行了荟萃分析。随后的体外试验中,我们用PHB质粒转染ER阳性乳腺癌细胞株MCF-7和T47D,检测转染后PHB mRNA和PHB蛋白的表达,以验证PHB质粒是否成功转染。MTT法检测转染PHB质粒后细胞株的增殖情况,流式细胞术检测转染后ER阳性乳腺癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的变化。实时定量PCR和免疫印迹法分别检测转染后AR mRNA和AR蛋白的表达。最后用免疫荧光染色法(IF)验证PHB和AR的蛋白表达,并显示其亚细胞定位。结果:PHB和AR在人乳腺癌组织中低表达,PHB表达与淋巴结转移(P=0.034)、ER(P0.001)、PR(P0.001)和 HER-2 的表达(P=0.009)相关。AR表达与患者年龄(P=0.014)、ER(P=0.016)和E-钙粘蛋白表达(P=0.043)相关。Spearman等级相关性分析表明,PHB和AR表达呈显著正相关(r = 0.521,P0.001)。低表达PHB和AR与ER阳性乳腺癌患者更短的OS、DMFS正相关。PHB质粒瞬时转染MCF-7和T47D细胞株后,在mRNA和蛋白水平均检测到PHB表达显著升高,提示转染成功。PHB过表达质粒转染的细胞株中,细胞增殖速度明显减慢,细胞周期阻滞于S/G2期,细胞凋亡增多。转染组细胞株中,AR mRNA和AR蛋白表达均显著增加,与对照组相比差异有统计学意义(P.05)。IF显示AR主要定位于细胞核,转染后AR蛋白在核水平的表达显著增加(P0.05)。结论:PHB在乳腺癌组织中低表达,PHB低表达与乳腺癌患者的不良预后正相关。PHB过表达可抑制ER阳性乳腺癌细胞的增殖,改变细胞周期分布,促进细胞凋亡,显著增加AR在mRNA和蛋白水平的表达。在乳腺癌组织中,PHB和AR表达呈显著正相关。结果表明,PHB可以促进ER阳性乳腺癌中AR的活化,PHB和AR有望成为ER阳性乳腺癌治疗的潜在分子靶点。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9
【图文】：

显微照片,免疫组织化学法,乳腺癌组织,蛋白免疫

了这１２１例乳腺癌组织和相应的１２１例癌旁正常乳腺组织（ｎｏｎｃａｎｃｅｒｏｕｓ邋ｔｉｓｓｕｅｓ，逡逑ＮＣＴｓ）中ＰＨＢ和ＡＲ的蛋白表达。ＰＨＢ和ＡＲ蛋白免疫组织化学染色的代表逡逑性显微照片见图２－１。我们发现，在乳腺癌组织中ＰＨＢ和ＡＲ蛋白均显示为低逡逑２８逡逑

乳腺癌,生存时,检验计算,患者

Ｆｉｇ２－２Ａ逡逑图２－２．ＰＨＢ低表达与乳腺癌的不良预后相关。逡逑图２－２Ａ．在１４０２例乳腺癌患者中，通过Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ方法分析ＰＨＢ表达与患者总生存时逡逑间的关系。基于自动选择最佳临界值将患者分为ＰＨＢ邋“低表达”和ＰＨＢ邋“高表达”。ｌｏｇ－ｍｎｋ逡逑检验计算Ｐ值。逡逑Ｆｉｇ．２－２．邋Ｌｏｗ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＰＨＢ邋ｉｓ邋ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｐｏｏｒ邋ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ邋ｏｆ邋ｂｒｅａｓｔ邋ｃａｎｃｅｒ．逡逑Ｆｉｇ．邋２－２Ａ．Ｔｈｅ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋ＰＨＢ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｏｖｅｒａｌｌ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ邋ｗａｓ邋ａｎａｌｙｚｅｄ邋ｂｙ逡逑Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ｉｎ邋１４０２邋ｂｒｅａｓｔ邋ｃａｎｃｅｒ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ．邋Ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ｗｅｒｅ邋ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ邋ｉｎｔｏ邋４邋ｌｏｗ５邋ａｎｄ逡逑４ｈｉｇｈ！邋ＰＨＢ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｂａｓｅｄ邋ｏｎ邋ａｕｔｏ邋ｓｅｌｅｃｔ邋ｂｅｓｔ邋ｃｕｔｏｆｆ．邋Ｐ－ｖａｌｕｅｓ邋ｗｅｒｅ邋ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｌｏｇ－ｒａｎｋ逡逑ｔｅｓｔ．逡逑３６逡逑

方法分析,患者,生存时,检验计算

逦０逡逑Ｆｉｇ２－２Ａ逡逑图２－２．ＰＨＢ低表达与乳腺癌的不良预后相关。逡逑图２－２Ａ．在１４０２例乳腺癌患者中，通过Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ方法分析ＰＨＢ表达与患者总生存时逡逑间的关系。基于自动选择最佳临界值将患者分为ＰＨＢ邋“低表达”和ＰＨＢ邋“高表达”。ｌｏｇ－ｍｎｋ逡逑检验计算Ｐ值。逡逑Ｆｉｇ．２－２．邋Ｌｏｗ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＰＨＢ邋ｉｓ邋ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｐｏｏｒ邋ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ邋ｏｆ邋ｂｒｅａｓｔ邋ｃａｎｃｅｒ．逡逑Ｆｉｇ．邋２－２Ａ．Ｔｈｅ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋ＰＨＢ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｏｖｅｒａｌｌ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ邋ｗａｓ邋ａｎａｌｙｚｅｄ邋ｂｙ逡逑Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ｉｎ邋１４０２邋ｂｒｅａｓｔ邋ｃａｎｃｅｒ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ．邋Ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ｗｅｒｅ邋ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ邋ｉｎｔｏ邋４邋ｌｏｗ５邋ａｎｄ逡逑４ｈｉｇｈ！邋ＰＨＢ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｂａｓｅｄ邋ｏｎ邋ａｕｔｏ邋ｓｅｌｅｃｔ邋ｂｅｓｔ邋ｃｕｔｏｆｆ．邋Ｐ－ｖａｌｕｅｓ邋ｗｅｒｅ邋ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｌｏｇ－ｒａｎｋ逡逑ｔｅｓｔ．逡逑３６逡逑

【参考文献】