过表达OTUD1对结肠癌细胞HCT116增殖和侵袭的影响及机制研究

发布时间：2020-07-09 20:09

【摘要】：目的:探讨卵巢癌结构域蛋白酶-1(ovarian tumor domain-containing protease-1,OTUD1)基因对人结肠癌细胞HCT116增殖和侵袭的作用及机制。方法:选取低表达OTUD1的人结肠癌细胞株,利用慢病毒包装技术过表达OTUD1基因,空载质粒作对照,嘌呤霉素筛选后构建稳定转染的结肠癌细胞株。RT-PCR(reverse transcription PCR)和Western blot技术检测转染效率。细胞迁移和侵袭实验检测2组细胞迁移和侵袭能力的改变。细胞增殖实验和流式细胞术检测2组细胞增殖能力的变化。克隆形成实验检测2组细胞的克隆形成能力。Western blot技术分析相关蛋白分子水平的变化,探讨其可能的机制。结果:6株结肠癌细胞株中HCT116细胞的OTUD1蛋白表达水平最低,并成功构建过表达OTUD1基因的结肠癌细胞株HCT116-OTUD1。与对照组HCT116-Control细胞相比,HCT116-OTUD1细胞株迁移(P=0.000)和侵袭能力减弱(P=0.000),CCK-8增殖实验显示实验组细胞增殖水平下降(P=0.004),EDU流式检测结果显示细胞增殖水平下降(P=0.000),克隆形成能力下降(P=0.017)。上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子E-cadherin表达水平上调,Vimentin表达水平下调,增殖相关信号通路分子p-AKT、p-ERK1/2表达水平下调。结论:过表达OTUD1可以通过减弱细胞的EMT作用来影响其迁移和侵袭能力,并抑制细胞的增殖能力,这种变化可能与MAPK/Erk和PI3K/Akt信号通路的激活受到抑制有关。

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本文编号：2747921