SASH1、E-cadherin、p53表达及Braf突变与甲状腺乳头状癌关系的研究
发布时间：2020-07-15 00:57
【摘要】：[目的]检测候选抑癌基因SASH1和抑癌基因E-cadherin、p53在甲状腺乳头状癌中的表达水平和BRAF基因突变情况,探讨四者关系以及与临床病理参数的关系,尝试探索四者在甲状腺乳头状癌发生过程中的作用。[方法]第一部分,选择甲状腺乳头状癌病例59例,使用免疫组织化学染色手段,观察SASH1、E-cadherin、p53在甲状腺乳头状癌癌细胞和癌旁细胞中的表达情况。对表达在胞浆的SASH1蛋白和胞膜的E-cadherin蛋白记录平均光密度,表达于胞核的p53蛋白记录平均阳性细胞数。使用SPSS统计SASH1、E-cadherin平均光密度和p53阳性表达比例与临床病理参数的关系以及互相之间表达情况的关系。第二部分,选择36例患者,使用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)对肿瘤细胞DNA进行扩增,检测BRAF基因突变率,分析其与临床病理参数及 SASH1、p53、E-cadherin 的关系。[结果]第一部分:(1)59例患者中,免疫组化显示,SASH1在甲状腺乳头状癌癌细胞中表达平均光密度为0.03369±0.02473,癌旁滤泡上皮细胞平均光密度为0.04283±0.03208,癌细胞的SASH1表达低于癌旁滤泡上皮细胞,差异具有统计学意义(t=2.246,p=0.0290.05)。E-cadherin在甲状腺乳头状癌癌细胞中表达平均光密度为0.05027±0.02803,癌旁滤泡上皮细胞平均光密度为0.06272±0.03475,差异有统计学意(t=2.203,p=0.0320.05)。(2)癌细胞SASH1蛋白表达与肿瘤是否为多灶发病,是否局限于单侧有关(r=0.325,p=0.0120.05),单侧多灶甲状腺乳头状癌平均光密度为0.03485±0.02597,双侧多灶甲状腺乳头状癌平均光密度为0.02639±0.02258,单侧单发甲状腺乳头状癌平均光密度为0.04420±0.02402,差异具有统计学意义(p0.05)。SASH1蛋白表达水平与患者性别、年龄、肿瘤最大径、淋巴结转移、血清促甲状腺素.(Thyroid Stimulating Hormone,TSH)、TNM 分期、是否伴包膜及周围组织侵犯无相关性(p0.05)。Logistic回归显示SASH1蛋白表达水平是多灶发病的保护因素,而肿瘤大小(1.10± 1.06)为多灶发病的危险因素。癌细胞E-cadherin蛋白平均光密度在年龄大于45岁患者中为0.05944±0.03457,高于年龄不满45岁患者的平均光密度0.04442±0.02146,差异具有统计学意义(p0.05)且与年龄存在正相关性(相关系数r=0.294,p0.05),.并与TSH水平存在正相关性(相关系数r=0.339,p0.05)。癌细胞E-cadherin平均光密度与性别、肿瘤直径、淋巴结是否转移、TNM分期、肿瘤多灶性、肿瘤多中心性、是否伴包膜及周围组织侵犯无关(p0.05)。Logistic回归显示肿瘤细胞E-cadherin平均光密度是淋巴结转移的保护因素,而肿瘤大小(1.10± 1.06 cm)是淋巴结转移的危险因素。SASH1与E-cadherin的蛋白表达之间并无显著相关性(p0.05)。(3)59例患者p53检测阳性21例,阴性38例。p53表达与TNM分期、年龄、性别、肿瘤直径、多灶性、淋巴转移无关(p0.05)。p53阳性组与阴性组的SASH1平均光密度和E-cadherin平均光密度均无显著差异。但p53阳性组的癌旁正常细胞表达SASH1的平均光密度0.05402±0.03606,较阴性组平均光密度 0.03647±0.02815 更高,差异存在统计学意义(t=2.058,p=0.040.05)。第二部分:36例患者中,伴有BRAF V600E位点突变患者29例,BRAF V600E野生型7例,突变率高达80.6%。突变组患者术前血清TSH为2.2675±1.630,野生型组患者术前血清TSH为1.102±0.644,突变组患者血清TSH较高,有统计学意义,(t=2.647,p=0.0170.05),而性别、淋巴结转移、多灶性、多中心性、年龄、肿瘤直径、TNM分期、SASH1表达、E-cadherin表达、p53阳性率并没有显著的差异(p0.05)。[结论]1.SASH1在甲状腺乳头状癌肿瘤细胞中表达低于癌旁正常细胞,多灶性甲状腺乳头状癌的SASH1表达低于单灶性甲状腺乳头状癌。SASH1有可能是引起甲状腺乳头状癌多灶发病的原因之一,可能作为分子标记用于甲状腺乳头状癌的治疗和诊断。2.E-cadherin在甲状腺乳头状癌中的表达低于癌旁细胞,表达情况与年龄呈正相关,是淋巴结转移的保护因素。3.p53在甲状腺乳头状癌表达阳性组与阴性组间间的临床参数并没有显著区别,肿瘤细胞表达SASH1程度、E-cadherin程度无显著差异。4.BRAF(V600E)位点突变率在甲状腺乳头状癌中较高,TSH水平在突变组与野生型组间存在差异,结合TSH水平和BRAF突变情况,对于甲状腺乳头状癌的诊断具有积极意义。但组间SASH1、E-cadherin、p53的表达没有显著差异。5.SASH1、E-cadherin、p53、BRAF突变可能通过不同的信号通路参与了甲状腺乳头状癌的发生发展。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R736.1
【图文】：
通过对大数据库ＴＣＧＡ数据库进行检索，可以得到大量ＲＮＡ水平相关性，再逡逑根据相关文献，选择查看ＳＡＳＨ１与ＣＤＨ１邋（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）和ＴＰ５３邋（ｐ５３）的ＲＮＡ水平相逡逑关性（图１）。可见，在ＲＮＡ７Ｋ平，ＳＡＳＨ１与ＣＤＨ１为正相关，与ＴＰ５３负相关。逡逑ＳＡＳＨ１邋（ＳＡＭ－ａｎｄ邋ＳＨ３－ｄｏｍａｉｎ邋ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ邋１）是邋２００３邋年由邋Ｚｅｌｌｅｒ邋等研究乳腺逡逑癌细胞杂交性丢失时发现的基因，位于人染色体６ｑ２４．邋３位点［５］。ＳＡＳＨ１基因含逡逑２７９７４６个碱基对，包括２２个外显子、２１个内含子，其转录ｍＲＮＡ产物有两种，逡逑长度分别为７．邋５ｋｂ和４．邋４ｋｂ，其中７．邋５ｋｂ产物表达较少，仅在脑组织中大量表达，逡逑而４．邋４ｋｂ产物则在除淋巴细胞和树突细胞以外的正常组织内大量表达。ＳＡＳＨ１编逡逑码蛋白含有１２４７个l#基酸，分子量１４０ｋｄａ，含有两个ＳＡＭ（ｓｔｅｒｉｌｅａｍｏｄｕｌｅ）逡逑８逡逑
逡逑２．邋４统计学处理逡逑使用ＳＰＳＳ邋２２．０软件进行统计分析。计量资料用ｘ±ｓ表示，计数资料用百逡逑分数表示，可信区间为９５％，邋ｐ＜０．邋０５有统计学差异。计量资料比较使用ｔ检验，逡逑多组资料比较使用方差分析和秩和检验，使用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析危险因素。逡逑结果逡逑１临床资料逡逑男性１？例，占１６．邋９％，女性４９例，占７３．邋１％。不满４５岁３６例占６１．０％，大逡逑于４５岁２３例，占３９．邋０％。逡逑２邋ＨＥ染色结果逡逑５９例均取得癌旁组织和病灶组织（图３）。镜下见肿瘤细胞排列为不规则乳逡逑头状。肿瘤细胞胞浆浅染，胞核肥大呈毛玻璃状，５９例均为经典甲状腺乳头状逡逑癌，未见特殊亚型。逡逑
３．１邋ＳＡＳＨ１在甲状腺乳头状癌中的表达情况逡逑ＳＡＳＨ１蛋白主要在甲状腺滤泡上皮细胞的胞质内表达，出现棕色深黄色颗粒逡逑（图４）。本实验中，入组的５９例甲状腺乳头状癌癌细胞均有强弱不等的表达，逡逑在癌旁正常滤泡组织中，普遍表达（图５）。逡逑‘ｒ0l#沿：ｗ、‘逦ｙ邋ｖ逡逑？１邋＃邋＾邋Ｊ－逦＾邋ＩＬｖ－邋％逦＼逦｜ＬＶ逡逑丨？、？邋．逦＾邋ｆ邋＾Ｗｋ邋ｌｙ逡逑？逦＊邋＾邋４邋４？ｖ邋■邋＇Ｍ邋Ｈ邋１邋－＇５－逦＜逦＾逦、逡逑ｒ＂邋、，逦’}恪溃恚海妫殄危皱义希掊危㈠纬у澹罚澹垮澹蝈澹椋驽危缅义贤迹矗澹樱粒樱龋敝琢鱿赴泶铮兀玻埃板瓮迹担澹樱粒樱龋卑┡韵赴泶铮兀玻埃板义贤ü觳庀赴凶厣帕Ｏ喽杂谙赴寤钠骄饷芏龋员劝┡宰橹氚╁义舷赴钠骄饷芏龋⑾郑矗袄颊甙┫赴骄饷芏冉习┡韵赴饷芏鹊停保瑰义侠颊甙┫赴骄饷芏冉习┡韵赴啾雀
本文编号：2755733
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R736.1
【图文】：
通过对大数据库ＴＣＧＡ数据库进行检索，可以得到大量ＲＮＡ水平相关性，再逡逑根据相关文献，选择查看ＳＡＳＨ１与ＣＤＨ１邋（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）和ＴＰ５３邋（ｐ５３）的ＲＮＡ水平相逡逑关性（图１）。可见，在ＲＮＡ７Ｋ平，ＳＡＳＨ１与ＣＤＨ１为正相关，与ＴＰ５３负相关。逡逑ＳＡＳＨ１邋（ＳＡＭ－ａｎｄ邋ＳＨ３－ｄｏｍａｉｎ邋ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ邋１）是邋２００３邋年由邋Ｚｅｌｌｅｒ邋等研究乳腺逡逑癌细胞杂交性丢失时发现的基因，位于人染色体６ｑ２４．邋３位点［５］。ＳＡＳＨ１基因含逡逑２７９７４６个碱基对，包括２２个外显子、２１个内含子，其转录ｍＲＮＡ产物有两种，逡逑长度分别为７．邋５ｋｂ和４．邋４ｋｂ，其中７．邋５ｋｂ产物表达较少，仅在脑组织中大量表达，逡逑而４．邋４ｋｂ产物则在除淋巴细胞和树突细胞以外的正常组织内大量表达。ＳＡＳＨ１编逡逑码蛋白含有１２４７个l#基酸，分子量１４０ｋｄａ，含有两个ＳＡＭ（ｓｔｅｒｉｌｅａｍｏｄｕｌｅ）逡逑８逡逑
逡逑２．邋４统计学处理逡逑使用ＳＰＳＳ邋２２．０软件进行统计分析。计量资料用ｘ±ｓ表示，计数资料用百逡逑分数表示，可信区间为９５％，邋ｐ＜０．邋０５有统计学差异。计量资料比较使用ｔ检验，逡逑多组资料比较使用方差分析和秩和检验，使用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析危险因素。逡逑结果逡逑１临床资料逡逑男性１？例，占１６．邋９％，女性４９例，占７３．邋１％。不满４５岁３６例占６１．０％，大逡逑于４５岁２３例，占３９．邋０％。逡逑２邋ＨＥ染色结果逡逑５９例均取得癌旁组织和病灶组织（图３）。镜下见肿瘤细胞排列为不规则乳逡逑头状。肿瘤细胞胞浆浅染，胞核肥大呈毛玻璃状，５９例均为经典甲状腺乳头状逡逑癌，未见特殊亚型。逡逑
３．１邋ＳＡＳＨ１在甲状腺乳头状癌中的表达情况逡逑ＳＡＳＨ１蛋白主要在甲状腺滤泡上皮细胞的胞质内表达，出现棕色深黄色颗粒逡逑（图４）。本实验中，入组的５９例甲状腺乳头状癌癌细胞均有强弱不等的表达，逡逑在癌旁正常滤泡组织中，普遍表达（图５）。逡逑‘ｒ0l#沿：ｗ、‘逦ｙ邋ｖ逡逑？１邋＃邋＾邋Ｊ－逦＾邋ＩＬｖ－邋％逦＼逦｜ＬＶ逡逑丨？、？邋．逦＾邋ｆ邋＾Ｗｋ邋ｌｙ逡逑？逦＊邋＾邋４邋４？ｖ邋■邋＇Ｍ邋Ｈ邋１邋－＇５－逦＜逦＾逦、逡逑ｒ＂邋、，逦’}恪溃恚海妫殄危皱义希掊危㈠纬у澹罚澹垮澹蝈澹椋驽危缅义贤迹矗澹樱粒樱龋敝琢鱿赴泶铮兀玻埃板瓮迹担澹樱粒樱龋卑┡韵赴泶铮兀玻埃板义贤ü觳庀赴凶厣帕Ｏ喽杂谙赴寤钠骄饷芏龋员劝┡宰橹氚╁义舷赴钠骄饷芏龋⑾郑矗袄颊甙┫赴骄饷芏冉习┡韵赴饷芏鹊停保瑰义侠颊甙┫赴骄饷芏冉习┡韵赴啾雀
本文编号：2755733
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