口腔癌发病风险预测模型构建及相关长链非编码RNA的筛选和验证

发布时间：2020-07-15 18:51

【摘要】：目的探讨口腔癌发病的环境影响因素,构建口腔癌发病风险预测模型;筛选口腔癌组织和癌旁组织中差异表达的长链非编码RNA,扩大样本验证并进行体外细胞功能学实验的机制研究。方法1.采用病例对照研究设计,面访调查1012例口腔癌新发病例和3087例健康对照,收集研究对象的饮食和生活方式等环境暴露资料。采用非条件Logistic回归模型方法评估环境因素对口腔癌发病风险的调整比值比及其95%的可信区间。2.根据多因素Logistic回归筛选出的口腔癌独立影响因素,基于OR值、β系数及nomogram方法构建三种口腔癌发病风险预测模型,利用ROC曲线下面积评估预测模型的预测效能。3.利用Agilent Human lncRNA 4×180K基因芯片技术筛选3对口腔癌组织和癌旁组织中表达差异的lncRNAs,采用qRT-PCR方法在81对口腔癌和癌旁组织中验证其中5条lncRNAs的表达水平。采用t检验或Wilcoxon秩和检验、χ~2检验分析两组间的差异及与患者肿瘤病理特征的关联。4.构建lncRNA ENST00000470447.1过表达重组质粒和空白对照质粒,通过CCK-8、Transewell、细胞划痕以及流式细胞术等实验探讨lncRNA ENST00000470447.1过表达对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖、迁移、侵袭和调亡能力的影响。结果1.吸烟、饮酒、中重度烹饪油烟、高口腔卫生指数(不良口腔卫生状况)是口腔癌发病的危险因素。饮茶、较高频率摄入鱼类、其他海鲜、新鲜蔬菜水果和蛋类可降低口腔癌的发病风险。2.根据nomogram构建的口腔癌发病风险预测模型表现出最佳的预测效能(AUC=0.721,95%CI:0.702~0.739),且该预测模型的分值与口腔癌的关联强度呈非线性剂量-反应关系。Nomogram预测模型分值与肿瘤家族史之间存在相乘及相加交互作用(OR_(相乘)=2.83,95%CI:2.20~3.64)。3.通过lncRNA表达谱芯片检测发现口腔癌与癌旁组织之间差异表达的lncRNAs,总共2617条,约占总lncRNA的8.97%(2617/29187):其中上调280条,下调2337条。4.ENST00000470447.1、ENST00000412353.1和ENST00000506106.1在口腔癌组织中的相对表达水平均低于配对癌旁组织,差异具有统计学意义(P0.001),且验证结果与芯片检测结果的表达方向一致。5.ENST00000470447.1表达水平与口腔癌患者的病理类型和分化程度相关(P0.05),ENST00000506106.1的表达与患者的病理类型和淋巴结转移有关(P0.05)。6.体外细胞实验结果显示:与空白对照质粒相比,ENST00000470447.1过表达重组质粒可降低舌鳞癌细胞Tca-8113的存活率、迁移率和侵袭率,且细胞早期凋亡率明显增高。结论1.吸烟、饮酒、中重度烹饪油烟和不良口腔卫生状况是口腔癌发病的主要危险因素。规律饮茶、多食鱼类、其他海鲜、新鲜蔬菜水果和蛋类是口腔癌的保护因素。2.根据nomogram构建的口腔癌风险预测模型具有最佳的预测效果和应用价值。3.ENST00000470447.1、ENST00000412353.1和ENST00000506106.1在口腔癌中表达下调。4.ENST00000470447.1和ENST00000506106.1与口腔癌患者的病理类型、分化程度和淋巴结转移存在关联。5.ENST00000470447.1过表达可抑制Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进其凋亡,在口腔癌的发生进程中发挥重要调控作用。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.8
【图文】：

列线图,列线图,口腔癌,预测模型

表 1.8（续）变量变量赋值变量对应分值预测模型 1a预测模型 2b预测模型 3c水果≥3 次/周 0 0.00 0 0.00<3 次/周 1 1.34 9 9.20口腔卫生指数0-2 0 0.00 0 0.003-5 1 1.19 8 4.306-8 2 2.26 12 8.60注：a为变量的 OR 值-1；b为变量的β值×10 后四舍五入取整；c为变量根据列线图读取的对应分值。

口腔癌,预测模型,立方样条,非线性检验

22图 1.5 Nomogram 所预测与实际观察的口腔癌发生率的校准图3.4.2 Nomogram 预测模型与口腔癌的关系限制性立方样条的分析表明随着 nomogram 预测模型的分值逐渐增加，口腔癌的发病风险也逐渐升高，呈非线性剂量-反应关系（非线性检验，P<0.05），见图 1.6。进一步根据对照组的三分位数将 nomogram 预测模型的分值划分为<11.1，11.1~和≥19.1 三组。经调整后结果显示：分值为 11.1~和≥19.1 组患口腔癌的风险分别是分值<11.1 组的 1.98 倍（95CI:1.55~2.53）和 6.81 倍

口腔癌,关联强度,预测模型,家族史

图 1.6 Nomogram 预测模型的分值与口腔癌关联强度的关系表 1.8 Nomogram 预测模型与口腔癌的关系以及分层分析变量病例 n(%) 对照 n(%) OR(95%CI) OR(95%Comogram 分值<11.1 128(12.65) 1026(33.24) 1.00 1.0011.1~ 215(21.25) 1027(33.26) 1.68(1.33~2.12) 1.98(1.55~2≥19.1 669(66.10) 1034(33.50) 5.19(4.21~6.38) 6.81(5.42~8P trend <0.001 <0.001瘤家族史mogram 分值<11.1 35(6.08) 415(32.88) 1.00 1.0011.1~ 116(20.14) 426(33.76) 1.51(1.17~1.95) 1.81(1.39~2≥19.1 425(73.78) 421(33.36) 4.80(3.84~6.00) 6.38(4.99~8P trend <0.001 <0.001瘤家族史mogram 分值<11.1 39(12.15) 390(32.75) 1.00 1.00

【参考文献】