胰蛋白酶影响T细胞受体表达在胰腺癌中的意义

发布时间：2020-08-13 18:24

【摘要】：目的:1.探讨胰腺癌患者中的免疫学失调情况;2.明确胰蛋白酶与胰腺癌之间存在的关系;3.在体内体外分别验证胰蛋白酶影响TCR的表达情况。方法:1.血液样本收集本课题收集了从2015年12月至2017年12月之间入住福建医科大学附属第一病院肝胆外科,行外科手术切除并经过术后病理金标准确诊,且全部的相关的临床资料完整的胰腺癌患者的外周血液标本共103例。在本课题所入选的所有收集的外周血液样本的胰腺癌患者,在手术前均未接受任何的化疗、放疗及分子靶向及中药中药等治疗。2.患者入院术前血常规数据收集。收集课题时间跨度中的103例符合标准的胰腺癌患者及正常体检人群369例血常规中的淋巴细胞计数。3.胰腺癌患者胰蛋白酶PRSS1表达的检测。将所有收集的103例胰腺癌患者和369例正常体检人群为对照组的血液标本,血液标本放置于-80度冰箱,进行DNA提取,行PCR扩增,基因测序,最后行ELISA试剂盒测血清胰蛋白酶浓度。4.检测胰蛋白酶PRSS1过表达的胰腺癌细胞株、动物模型与对照的空载胰腺癌细胞株、动物模型(PRSS1正常表达)中TCRVβ各基因型的表达情况。5.检测胰蛋白酶PRSS1过表达的胰腺癌细胞株与对照的空载胰腺癌细胞中的CD抗原、白介素及MAPK的表达情况。6.实验数据统计将本课题实验所得的所有数据全部逐一录入SPSS19.0软件中,并对所有的数据进行多次核对确认,准确核对无误后,并再对所有数据进行系统的统计分析。采用χ2检验分析胰蛋白酶PRSS1在不同基因型及不同分期的胰腺癌患者中的表达情况同胰腺癌患者的临床病理参数存在相关性。应用T检验分析胰蛋白酶PRSS1过表达的淋巴细胞计数、TCRVβ细胞株及小鼠模型中的表达情况。用F检验分析胰腺癌细胞株及小鼠模型中的CD抗原、白介素及MAPK数据。在数据的统计分析过程中所用的假设检验均是应用双侧检验,当P0.05时,被认为有着统计学差异。结果:1.基因测序结果显示PRSS1在胰腺癌患者中呈高表达,PRSS1 SNP位点T/C基因型与T/T、C/C基因型有明显差异,PRSS1表达与胰腺癌分期、生存期有关。2.胰腺癌患者与正常人群对比淋巴细胞计数差异明显低于正常人群,P0.05有统计学意义。3.统计学分析显示胰腺癌患者胰蛋白酶PRSS1表达情况与年龄、性别、手术切缘、肿瘤大小、肿瘤位置、是否淋巴结转移、是否存在神经侵犯、是否存在远处转移、肿瘤细胞的分化程度、是否出现神经侵犯等情况无明显的相关性,而与胰腺癌患者的临床分期、是否存在淋巴结转移有着显著相关性。4.在PRSS1过表达的胰腺癌患者其TCRVβ中的Dβ1的表达降低,P0.05,差异有统计学意义。5.胰腺癌胰蛋白酶PRSS1过表达细胞株与对照空载组细胞株的CD抗原(CD3D、CD5、CD14、CD27、CD164)表达明显降低、白介素(IL6R、IL6ST、IL7、IL7R、IL8、IL13RA1、IL13RA2、IL15、)表达明显增高及MAPK中(MMP2、MAP2K4、MAP2K5、MAP3K1、MAP3K2、MAP3K4、MAP3K5、MAP3K7、MAP3K8)等表达明显增强。6.统计学分析显示胰蛋白酶PRSS1过表达的胰腺癌细胞株与对照空载的胰腺癌细胞株的CD抗原、白介素及MAPK表达有差异,P0.05,差异有统计学意义。结论:1.与正常人群对比PRSS1在胰腺癌患者中存在高表达;在胰腺癌的不同期患者中PRSS1的表达差异有着统计学意义;胰蛋白酶PRSS1与胰腺癌患者的临床分期、生存期存在明显相关性。2.胰腺癌患者与正常同期体检人群比较,胰腺癌患者的淋巴细胞计数低,差异有统计学意义。3.胰蛋白酶PRSS1在胰腺癌患者的疾病发展过程中存在相关性。与胰腺癌患者的年龄、性别、淋巴结转移、神经侵犯、远处转移、肿瘤细胞的分化程度、是否出现神经侵犯等情况无明显的相关性,而与胰腺癌患者的临床分期、是否存在淋巴结转移有着显著相关性。4.胰蛋白酶PRSS1被认为可能是提示胰腺癌预后的有效的生物学指标,当胰蛋白酶的表达水平越高时,胰腺癌患者的预后越差。5.PRSS1过表达的胰腺癌细胞株、小鼠模型与对照空载的胰腺癌细胞株、小鼠模型的TCR Dβ1的表达存在差异,过表达细胞株及动物模型中的Dβ1表达明显高于对照组,P0.05,差异有统计学意义。6.PRSS1过表达的胰腺癌细胞株与对照空载组细胞株的CD抗原、白介素及MAPK的表达存在明显差异,过表达的PRSS1可能通过改变胰蛋白酶浓度,使胰腺癌患者癌细胞的微环境发生变化,从而影响胰腺癌的进展,可能是通过对MAPK途径的调控影响胰腺癌发展。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.9

【参考文献】