吡非尼酮抑制肿瘤相关成纤维细胞促进结肠癌细胞系HT29上皮间质转化的作用及机制

发布时间：2020-10-08 19:45

　　 目的:探讨吡非尼酮在肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)诱导的HT29结肠癌细胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化(EMT)中的作用及机制。方法:利用共培养小室将CAFs与HT29共培养后CCK-8测定HT29增殖效率;Real time-PCR和Western blot检测HT29结肠癌细胞系E-cadherin和Vimentin转录及蛋白表达水平;Transwell实验检测HT29结肠癌细胞的迁移和侵袭能力。ELISA技术检测CAFs细胞上清液中细胞因子的表达。结果:吡非尼酮抑制CAFs对HT29增殖促进作用(P0.05);CAFs条件培养基培养HT29后,Vimentin表达水平显著升高(P0.05),E-cadherin显著降低(P0.05);吡非尼酮处理CAFs的条件培养基对HT29细胞中两种蛋白无明显影响;Transwell实验表明CAFs与HT29共培养后,其侵袭和迁移能力明显增强(P0.05);ELISA结果提示CAFs分泌TGF-β1功能受吡非尼酮抑制且存在剂量关系。结论:吡非尼酮通过抑制CAFs分泌TGF-β1抑制CAFs诱导HT29结肠癌细胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 材料
        1.1.2 主要试剂
    1.2 研究方法
        1.2.1 筛选药物浓度
        1.2.2 细胞培养
        1.2.3 CCK8实验
        1.2.4 Transwell实验
            1.2.4.1 Transwell侵袭实验:
            1.2.4.2 Transwell迁移实验:
        1.2.5 ELISA
        1.2.6 RT-PCR及Western blot检测HT29细胞
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 药物浓度筛选结果
    2.2 CCK8实验检测增殖作用
    2.3 Transwell实验
        2.3.1 Transwll侵袭实验
        2.3.2 Transwell迁移实验
    2.4 ELISA实验检测PFD对CAFs分泌TGF-β1、IL-6因子的作用
    2.5 RT-PCR及Western
3 讨论

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本文编号：2832676