CA19-9时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立

发布时间：2020-10-17 22:12

　　 CA19-9是一种糖蛋白,在胰腺癌、胆道癌、结肠癌、胃癌等恶性肿瘤患者体内高水平表达,因此检测CA19-9的含量可以对相关恶性肿瘤进行早期筛查及辅助诊断。目前,临床上针对CA19-9的检测方法有许多,随着国家分级诊疗制度的建设,急需适用于基层医疗单位的床旁快速检测方法。随着体外诊断技术的快速发展,荧光免疫层析技术现已成为床旁快速检测的重要手段之一。基于此,本研究拟建立一种新型荧光免疫层析定量检测CA19-9的方法。主要采用杂交瘤技术制备CA19-9单克隆抗体,筛选出符合要求的CA19-9配对单克隆抗体用于荧光免疫层析检测方法的建立。在此基础上,利用荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球为标记物,NC膜为载体,将筛选的CA19-9配对抗体分别进行标记和包被,并对试纸条制备过程中的主要原材料进行筛选,对工艺、最佳反应时间进行优化,制备定量检测血清中CA19-9的荧光免疫层析检测试纸条。通过对试纸条的线性范围、精密性、特异性等性能指标进行检测比对,以评价本研究建立的CA19-9荧光免疫层析定量检测方法。本研究筛选得到2对较优的CA19-9单克隆抗体配对组合,利用荧光免疫层析法进行进一步的应用筛选,其中以M-2E3、M-2D8作为配对抗体制备的试纸条的性能最优。经工艺优化,试纸条最佳检测时间为15min,得到的线性方程为y=0.0069x+0.0223,R~2=0.9865,检测线性范围为12.5-800 U/mL;最低检出限为9.74 U/mL,批内变异系数与批间变异系数均小于15%,平均回收率为101%;试纸条37℃加速破坏24天稳定性良好,与罗氏CA19-9试剂盒(电化学发光法)平行检测50份临床样本,R~2=0.9886,回归方程为y=0.9884x+3.8191,相关性良好。本研究成功制备了适用于荧光免疫层析检测方法的CA19-9配对单克隆抗体,初步建立了定量检测血清中CA19-9的荧光免疫层析检测方法,有较好的临床应用前景。
【学位单位】：河南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R730.43
【部分图文】：

图 2-1 荧光层析试纸条组成19-9 荧光免疫层析试纸条进的 C 线和 T 线后，在紫外检光值。点样反应完全后，试示荧光则试纸条无效；如果测限；如果 C、T 均显示荧Test line检测线1 2 3 4

图 3-1 4 株 CA19-9 单抗 SDS-PAGE 纯度鉴定注：1：M-1C4；2：M-2D8；3：M-2E3；4：M-2G3；亚型鉴定盒对 4 株 CA19-9 单抗进行亚型分析，结果如表 D8、M-2E3 单克隆抗体亚型均为 IgG1，M-2G3 单表 3-8 单克隆抗体亚型鉴定IgG2a-HRP IgG2b-HRP IgG3-HRP IgA-HRP 0.073 0.075 0.033 0.054 0.088 0.047 0.065 0.032 0.049 0.046 0.067 0.078 0.065 0.087 1.723 0.098 特异性鉴定

图 3-2 荧光微球稀释后荧光强度检测表 3-12 检测试纸条检测线（T 线）荧光强度T 值 1 号 2 号 3 号基质血清 164±16 147±14 254±24100 U/mL 16743±301 22365±424 20178±378 膜的选择如表3-13所示，HBRC-90与HBRC-12制备的试纸条检测灵敏度高，而的速度快，背景干净，因此选择型号为 HBRC-90 的 NC 膜进行 CA1测试纸条的制备。表 3-13 NC 膜的选择C 膜 HBRC-90 HBRC-12 HBR景 干净 有荧光 有荧
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本文编号：2845370