TAZ通过p38 MAPK通路调控膀胱癌细胞增殖和凋亡的机制研究
发布时间：2020-11-17 22:08
背景与目的:膀胱癌是导致世界癌症相关性死亡的最常见泌尿系统肿瘤。手术,放疗和化疗是目前膀胱癌患者的主要治疗方法,但生存率仍然不高。其中一个主要原因是膀胱癌进展的分子机制仍然不明确。Hippo信号通路和p38 MAPK通路是两个非常重要的通路。Hippo信号通路的核心由多组分激酶级联组成,其诱导磷酸化并抑制下游转录激活剂YAP和TAZ。YAP,TAZ或其他Hippo通路组分的放松管制将导致疾病的发生,包括许多癌症。p38 MAPK通路是另一种控制细胞生长和死亡的高度保守的途径。越来越多实验证明了p38 MAPK通路在肿瘤发生、发展、转移和化疗反应中发挥了重要作用。在本研究中,我们构建了含有TAZ编码区序列的sh RNA载体,以研究TAZ在膀胱癌细胞中的功能。此外,我们还探讨了Hippo信号通路与p38 MAPK通路之间的功能的相互作用。方法与结果:首先,我们进行荧光定量PCR实验确认了TAZ shRNA的干扰效率。其次,我们使用膀胱癌细胞系T24和5637进行细胞增殖实验。CCK-8和EdU细胞增殖实验表明,敲低TAZ的表达抑制了肿瘤细胞增殖。为了检测细胞凋亡,我们通过western blot实验证明了敲低TAZ的表达后,caspase3和cleaved-caspase3的蛋白水平增高,结果表明敲低TAZ诱导细胞凋亡。此外,western blot实验也提示了TAZ可能调节p38蛋白的稳定性。最后,为了研究p38的活性是否会影响TAZ对细胞增殖和凋亡的调控作用,我们使用p38抑制剂PH-797804阻断了p38的活性。Western blot实验结果显示,当使用PH-797804处理后,抑制TAZ表达所导致的cleaved-caspase3的蛋白水平增加这一上调作用消失,cleaved-caspase3的蛋白水平与阴性对照组相比无明显增加。而CCK-8和EdU细胞增殖实验的结果显示,通过PH-797804处理后,敲低TAZ导致的细胞增殖率降低这一结果被逆转,肿瘤细胞的增殖数目增多,EdU阳性率升高。研究结果表明了p38的活性介导TAZ对细胞增殖和凋亡的调控作用。结论:TAZ在膀胱癌的发生发展中起着致癌基因的作用,有可能成为膀胱癌的诊断标志物和治疗靶标。TAZ shRNA可能为膀胱癌的体外基础研究开辟了一条新的途径。
【学位单位】：深圳大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：
图 1 验证 TAZ 的敲低效率对照 shRNA 载体或 TAZ shRNA 载体转染 T24 细胞，并进行实时荧光NA 水平。结果用平均数±标准差表示，N(样本总数)=3,*** P<0.001。Z 的表达可以抑制膀胱癌细胞的增值为了研究 TAZ 是否调节膀胱癌细胞的生长，我们进行了细胞shRNA 载体或阴性对照 shRNA 载体的病毒转染两种膀胱癌细株。如图 2-A 和 2-B 的 CCK-8 实验所示，和对照组相比，s胞 T24(P<0.05)和 5637(P<0.05)的生长速率，可抑制细胞的增Z 的缺失会显著抑制膀胱癌细胞的生长。减慢或细胞凋亡可能导致细胞生长减少。为了研究 TAZ shR们用 EdU 染色分析细胞增殖。如图 2-C～H，与 shCtrl 对照组0.05)和 5637(P<0.05)细胞增值数目明显减少，EdU 阳性率降低
TAZ 通过 p38 MAPK 通路调控膀胱癌细胞增殖和A）和 5637（B)的细胞增殖；(C-H)：EdU 测定 T来显示细胞核。（E）和（H）分别计算了 T24 和差表示，N(样本总数)=3,* P<0.05。Z 的表达可以诱导细胞的凋亡细胞凋亡，我们用 shCtrl 和 shTAZ 病毒载体相关凋亡蛋白的表达量。如图 3 所示，敲低增加，同时 cleaved-caspase3（c-caspase3） 强烈地诱导细胞凋亡。
２８图 4 TAZ 调节 p38 蛋白的稳定性：敲低 TAZ 的表达增加 p38 蛋白质水平和磷酸化水平。用携带 shCtrl 或 shTAZ 载4 细胞，然后用指定的抗体进行 western blot 分析；（B）：TAZ 的过表达下调 p38 蛋量的 Flag-TAZ 质粒转染 T24 细胞，然后用指定的抗体进行 western blot 分析。（达不影响 p38 mRNA 的表达水平。用不同量的 Flag-TAZ 质粒转染 T24 细胞，然 PCR 分析 TAZ（C）和 p38（D）mRNA 水平。p38 的活性介导 TAZ 对细胞增殖和凋亡的调控尽管 p38 MAPK 通路在细胞增殖和凋亡中起着关键作用，但迄今为止还没AZ 的功能是由 p38 的活性介导的。为了验证 TAZ 敲低的效果是否由 p3导的，我们敲低了 TAZ 的表达，再使用 p38 抑制剂 PH-797804 阻断 p3
【参考文献】
本文编号：2887974
【学位单位】：深圳大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：
图 1 验证 TAZ 的敲低效率对照 shRNA 载体或 TAZ shRNA 载体转染 T24 细胞，并进行实时荧光NA 水平。结果用平均数±标准差表示，N(样本总数)=3,*** P<0.001。Z 的表达可以抑制膀胱癌细胞的增值为了研究 TAZ 是否调节膀胱癌细胞的生长，我们进行了细胞shRNA 载体或阴性对照 shRNA 载体的病毒转染两种膀胱癌细株。如图 2-A 和 2-B 的 CCK-8 实验所示，和对照组相比，s胞 T24(P<0.05)和 5637(P<0.05)的生长速率，可抑制细胞的增Z 的缺失会显著抑制膀胱癌细胞的生长。减慢或细胞凋亡可能导致细胞生长减少。为了研究 TAZ shR们用 EdU 染色分析细胞增殖。如图 2-C～H，与 shCtrl 对照组0.05)和 5637(P<0.05)细胞增值数目明显减少，EdU 阳性率降低
TAZ 通过 p38 MAPK 通路调控膀胱癌细胞增殖和A）和 5637（B)的细胞增殖；(C-H)：EdU 测定 T来显示细胞核。（E）和（H）分别计算了 T24 和差表示，N(样本总数)=3,* P<0.05。Z 的表达可以诱导细胞的凋亡细胞凋亡，我们用 shCtrl 和 shTAZ 病毒载体相关凋亡蛋白的表达量。如图 3 所示，敲低增加，同时 cleaved-caspase3（c-caspase3） 强烈地诱导细胞凋亡。
２８图 4 TAZ 调节 p38 蛋白的稳定性：敲低 TAZ 的表达增加 p38 蛋白质水平和磷酸化水平。用携带 shCtrl 或 shTAZ 载4 细胞，然后用指定的抗体进行 western blot 分析；（B）：TAZ 的过表达下调 p38 蛋量的 Flag-TAZ 质粒转染 T24 细胞，然后用指定的抗体进行 western blot 分析。（达不影响 p38 mRNA 的表达水平。用不同量的 Flag-TAZ 质粒转染 T24 细胞，然 PCR 分析 TAZ（C）和 p38（D）mRNA 水平。p38 的活性介导 TAZ 对细胞增殖和凋亡的调控尽管 p38 MAPK 通路在细胞增殖和凋亡中起着关键作用，但迄今为止还没AZ 的功能是由 p38 的活性介导的。为了验证 TAZ 敲低的效果是否由 p3导的，我们敲低了 TAZ 的表达，再使用 p38 抑制剂 PH-797804 阻断 p3
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 Valentina Grossi;Alessia Peserico;Tugsan Tezil;Cristiano Simone;;p38α MAPK pathway:A key factor in colorectal cancer therapy and chemoresistance[J];World Journal of Gastroenterology;2014年29期
2 李洪生;吴湖炳;王巧愚;韩彦江;王全师;;~(18)F-FDGPET/CTF-FDGPET/CT双时相显像在膀胱癌术前分期中的临床价值[J];南方医科大学学报;2014年04期
本文编号：2887974
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/2887974.html
