GDF11抑制肝癌细胞增殖作用的研究

发布时间：2020-12-05 10:23

　　目的:研究GDF11过表达对肝细胞癌细胞系SMMC-7721体内及体外增殖能力的影响,并初步分析其可能的作用机制。方法:构建重组质粒,包被慢病毒。筛选GDF11过表达的SMMC-7721细胞系（Lenti-GDF11 group）,同时以空载体感染组（Lenti-GFP group）及野生型细胞组（Control group）为对照。分别于培养24、48、72、96、120、144h时采用CCK-8法检测三种细胞体外增殖能力,绘制细胞增殖曲线,检测GDF11过表达对细胞体外增殖能力的影响;分别以500、1000、2000、5000个细胞的密度梯度接种,平板克隆实验检测GDF11过表达对细胞克隆形成能力的影响。配制不同梯度浓度的顺铂作用细胞24h,CCK-8法检测GDF11过表达对SMMC-7721细胞体外顺铂敏感性的影响。流式细胞术检测三种细胞细胞周期分布。同时培养实验组、空载体感染组及对照组细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。记录成瘤时间,绘制移植瘤体内生长曲线,2周后,剖取肿瘤,称取瘤重。应用免疫组织化学SP-9000三步法检测裸鼠移植瘤组织标本中GDF11、Ki-67蛋白的表达及肿瘤微... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Westernblot验证各组细胞中GDF11蛋白的表达情况，从左至右依次

450nm 波长的吸光度，绘制细胞增殖曲线。CCK-8 实验结胞组及阴性对照细胞组的生长速度接近，增殖较快，差异DF11 过表达 SMMC-7721 实验组细胞生长明显受到抑制，h 时细胞增殖抑制效应最显著（P<0.05）；表明 GDF11 过表胞癌 SMMC-7721 细胞的体外增殖能力（图 2）。

板克隆形成实验检测 GDF11 蛋白过表达对 SMMC-7721 细胞克隆响。GDF11 过表达明显抑制 SMMC-7721 细胞体外克隆形成能力。: Colony formation test was used to examine the colony formation averexpression coμld inhibit colony formation ability.F11 过表达增加肝细胞癌 SMMC-7721 细胞体外对顺铂的敏过不同处理的肝细胞癌 SMMC-7721 细胞经不同浓度顺铂（2.5、5、g/ml）作用 24h，CCK-8 法测定各组细胞不同药物浓度作用后的吸光抑制率。结果显示，GDF11 过表达组 SMMC-7721 细胞对顺铂作照组更敏感，不同浓度的抑制率均高于对照组(见图 4)，对照组及差异无统计学差异，且当顺铂浓度取 20μg/ml 及 40μg/ml 时，差异具有统计学意义。 三组细胞顺铂作用的 IC50 值分别为：野生型7721 细胞组 8.244μg/ml，空载体 SMMC-7721 细胞组为 7.818μg /m表达 SMMC-7721 组为 5.232μg /ml，实验组明显低于对照组，GD加强细胞对顺铂敏感性。


本文编号：2899303