HBV-miR-2在肝癌细胞中调控TRIM35和RAN的表达及机制研究
发布时间：2020-12-08 14:44
【目的】肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是肝脏的原发性恶性肿瘤,发病率占全球第五,但严重的预后不良使得其致死率升至第三。HCC的主要发病诱因有乙肝病毒（HBV）感染,肝硬化,丙肝病毒（HCV）感染,饮酒过度及黄曲霉毒素摄入等。Micro RNAs（mi RNAs）是一类在进化上高度保守,长约22nt,由内源基因编码的小非编码RNA,能够在转录后水平调控基因的表达。现有大量的实验研究表明:细胞内的mi RNAs在HCC的病程中亦可发挥重要作用,而同样有越来越多的证据发现,许多人和动物的病毒亦可编码mi RNAs,并且在宿主细胞中发挥作用。在前期研究中,本实验室通过深度测序以及大量的印证性实验证明了HBV编码的mi RNA（HBV-mi R-2）的存在,并且发现HBV-mi R-2亦可影响肝癌细胞的转移和增殖能力。本课题主要探究HBV-mi R-2对下游基因TRIM35和RAN的表达调控及其机制。【方法】为了弄清楚HBV-mi R-2在肝癌细胞中发挥作用的机制,我们首先利用生物信息学软件预测HBV-mi R-2的候选靶基因,并分析已知的相关功能,最终选定...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBV-miR-2与TRIM35-3’UTR、RAN-3’UTR的靶定关系
图 1.2 HBV-miR-2 直接靶定 TRIM35 和 RAN 的 3’UTR（A）在 Huh7 和 HepG2 细胞中，共转 pTRIM35-3’UTR 和 pHBV-miR-2；（B）在 HepG2.2.15细胞中，共转 pTRIM35-3’UTR 和 ASO-HBV-miR-2；（C）在 Huh7 和 HepG2 细胞中，共pRAN-3’UTR 和 pHBV-miR-2 ；（ D ）在 HepG2.2.15 细胞中，共转 pRAN-3’UTR 和ASO-HBV-miR-2 后，检测 EGFP 的荧光强度。ns: no significant, *意为 P<0.05，**意为 P<0.01，***意为 P<0.001，****意为 P<0.0001。1.2.3 HBV-miR-2 抑制 TRIM35 但促进 RAN 的 mRNA 和蛋白质的表达我 们 在 上 一 个 结 果 中 证 明 了 ， HBV-miR-2 能 靶 定 并 调 节 含 有TRIM35-3’UTR、RAN-3’UTR 的荧光报告载体中 EGFP 的表达，接下来就想探究 HBV-miR-2 是否可以调控内源性 TRIM35、RAN 的表达，在肝癌细胞中过表达或封闭 HBV-miR-2 后，利用 RT-qPCR、Western blot 检测细胞内 TRIM35 和RAN 的表达水平。结果显示（图 1.3）：在 HepG2 和 Huh7 中，过表达 HBV-miR-2后，TRIM35 mRNA 的表达水平分别降低了 40%和 50%左右，蛋白质的表达水
天津医科大学硕士学位论文 一、确定 HBV-miR-2 的靶基因平分别降低了 42%和 52%；RAN mRNA 的表达水平分别是对照组的 6 倍和 7 倍左右，蛋白质的表达水平分别是对照组的 1.89 倍和 2.06 倍。在 HepG2.2.15 中，封闭 HBV-miR-2 后，TRIM35 mRNA 的表达水平约是对照组的 2.3 倍，蛋白质的表达水平是对照组的 1.45 倍；RAN mRNA 的表达水平分别减少了 40%左右，蛋白质的表达水平分别减少了 67%。以上结果表明，HBV-miR-2 负向调控TRIM35 但正向调控 RAN 的 mRNA 和蛋白质水平的表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Autophagy and microRNA in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J]. Shan-Ying Wu,Sheng-Hui Lan,Hsiao-Sheng Liu. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[2]Molecular mechanism of hepatitis B virus X protein function in hepatocarcinogenesis[J]. Ming Geng,Xuan Xin,Li-Quan Bi,Lu-Ting Zhou,Xiao-Hong Liu. World Journal of Gastroenterology. 2015(38)
[3]Circulating micro RNAs as diagnostic and prognostic tools for hepatocellular carcinoma[J]. Yu-Cheng Zhang,Zhuo Xu,Tian-Fu Zhang,Ya-Li Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[4]Hepatocellular carcinoma in Asia: Prevention strategy and planning[J]. Sara Ashtari,Mohamad Amin Pourhoseingholi,Afsaneh Sharifian,Mohamad Reza Zali. World Journal of Hepatology. 2015(12)
[5]Hepatitis B virus and micro RNAs:Complex interactions affecting hepatitis B virus replication and hepatitis B virusassociated diseases[J]. Jason Lamontagne,Laura F Steel,Michael J Bouchard. World Journal of Gastroenterology. 2015(24)
[6]Liver cirrhosis in hepatic vena cava syndrome(or membranous obstruction of inferior vena cava)[J]. Santosh Man Shrestha. World Journal of Hepatology. 2015(06)
[7]MicroRNAs as therapeutic strategy for hepatitis B virusassociated hepatocellular carcinoma: Current status and future prospects[J]. Yi Lin Jane Tan,Wei Ning Chen. World Journal of Gastroenterology. 2014(20)
[8]Epigenetics in hepatocellular carcinoma: An update and future therapy perspectives[J]. Li Ma,Mei-Sze Chua,Ourania Andrisani,Samuel So. World Journal of Gastroenterology. 2014(02)
本文编号：2905255
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBV-miR-2与TRIM35-3’UTR、RAN-3’UTR的靶定关系
图 1.2 HBV-miR-2 直接靶定 TRIM35 和 RAN 的 3’UTR（A）在 Huh7 和 HepG2 细胞中，共转 pTRIM35-3’UTR 和 pHBV-miR-2；（B）在 HepG2.2.15细胞中，共转 pTRIM35-3’UTR 和 ASO-HBV-miR-2；（C）在 Huh7 和 HepG2 细胞中，共pRAN-3’UTR 和 pHBV-miR-2 ；（ D ）在 HepG2.2.15 细胞中，共转 pRAN-3’UTR 和ASO-HBV-miR-2 后，检测 EGFP 的荧光强度。ns: no significant, *意为 P<0.05，**意为 P<0.01，***意为 P<0.001，****意为 P<0.0001。1.2.3 HBV-miR-2 抑制 TRIM35 但促进 RAN 的 mRNA 和蛋白质的表达我 们 在 上 一 个 结 果 中 证 明 了 ， HBV-miR-2 能 靶 定 并 调 节 含 有TRIM35-3’UTR、RAN-3’UTR 的荧光报告载体中 EGFP 的表达，接下来就想探究 HBV-miR-2 是否可以调控内源性 TRIM35、RAN 的表达，在肝癌细胞中过表达或封闭 HBV-miR-2 后，利用 RT-qPCR、Western blot 检测细胞内 TRIM35 和RAN 的表达水平。结果显示（图 1.3）：在 HepG2 和 Huh7 中，过表达 HBV-miR-2后，TRIM35 mRNA 的表达水平分别降低了 40%和 50%左右，蛋白质的表达水
天津医科大学硕士学位论文 一、确定 HBV-miR-2 的靶基因平分别降低了 42%和 52%；RAN mRNA 的表达水平分别是对照组的 6 倍和 7 倍左右，蛋白质的表达水平分别是对照组的 1.89 倍和 2.06 倍。在 HepG2.2.15 中，封闭 HBV-miR-2 后，TRIM35 mRNA 的表达水平约是对照组的 2.3 倍，蛋白质的表达水平是对照组的 1.45 倍；RAN mRNA 的表达水平分别减少了 40%左右，蛋白质的表达水平分别减少了 67%。以上结果表明，HBV-miR-2 负向调控TRIM35 但正向调控 RAN 的 mRNA 和蛋白质水平的表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Autophagy and microRNA in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J]. Shan-Ying Wu,Sheng-Hui Lan,Hsiao-Sheng Liu. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[2]Molecular mechanism of hepatitis B virus X protein function in hepatocarcinogenesis[J]. Ming Geng,Xuan Xin,Li-Quan Bi,Lu-Ting Zhou,Xiao-Hong Liu. World Journal of Gastroenterology. 2015(38)
[3]Circulating micro RNAs as diagnostic and prognostic tools for hepatocellular carcinoma[J]. Yu-Cheng Zhang,Zhuo Xu,Tian-Fu Zhang,Ya-Li Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[4]Hepatocellular carcinoma in Asia: Prevention strategy and planning[J]. Sara Ashtari,Mohamad Amin Pourhoseingholi,Afsaneh Sharifian,Mohamad Reza Zali. World Journal of Hepatology. 2015(12)
[5]Hepatitis B virus and micro RNAs:Complex interactions affecting hepatitis B virus replication and hepatitis B virusassociated diseases[J]. Jason Lamontagne,Laura F Steel,Michael J Bouchard. World Journal of Gastroenterology. 2015(24)
[6]Liver cirrhosis in hepatic vena cava syndrome(or membranous obstruction of inferior vena cava)[J]. Santosh Man Shrestha. World Journal of Hepatology. 2015(06)
[7]MicroRNAs as therapeutic strategy for hepatitis B virusassociated hepatocellular carcinoma: Current status and future prospects[J]. Yi Lin Jane Tan,Wei Ning Chen. World Journal of Gastroenterology. 2014(20)
[8]Epigenetics in hepatocellular carcinoma: An update and future therapy perspectives[J]. Li Ma,Mei-Sze Chua,Ourania Andrisani,Samuel So. World Journal of Gastroenterology. 2014(02)
本文编号：2905255
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