BMI-1 siRNA通过阻断MD-2/TLR4/MyD88复合体调控的NF-κB信号通路抑制结直肠癌细胞迁移和EMT
发布时间：2020-12-10 13:35
目的:探讨在体外实验中,应用B细胞特异性莫罗尼白血病病毒插入位点1（BMI-1）siRNA沉默BMI1基因来通过阻断髓样分化蛋白-2（MD-2）/Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）复合体调控的核因子-κB（NF-κB）信号通路,抑制结直肠癌细胞迁移和上皮间质转化（EMT）,以应用于结直肠癌的靶向治疗中。方法:应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测人结直肠癌细胞白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA及蛋白的表达水平,应用RT-PCR和Western blot检测BMI-1、MD2、TLR4、MyD88mRNA及蛋白的表达水平,应用Western blot检测p-NF-κB p65、NF-κB p65、IκBα及波形蛋白（vimentin）、N-钙粘附蛋白（N-cadherin）、E-钙粘附蛋白（E-cadherin）的蛋白含量,采用四唑盐比色法（MTT）和Transwell小室（Transwell insert）评估人结直肠癌细胞的增殖和迁移能力的变化情况,应用B...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
建立炎症环境
图 2：研究 BMI-1 基因在 LPS 介导的结直肠癌细胞侵袭和 EMT 中的作用。HT-29 细胞先经 THP-1-CM 处理。MTT 用于评价经 THP-1-CM 处理后 HT-29（A）的增殖能力。Transwell 小室检测 HT-29（B）细胞侵袭能力。western blot 检测 HT-29（C 和 D）中 E-cadherin、N-cadherin 和 vimentin 蛋白的表达。GAPDH 作为内参照。光谱分析法定量测定蛋白质表达。计量资料用均值±标准差表示。至少进行三次独立实验。*为与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。#为与 THP-1-CM+sh-NC 组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。3．沉默 BMI-1 可抑制 TLR4/MD-2/MyD88 复合体介导的 NF-κB 信号通路TLR4 在肿瘤侵袭过程中起重要作用，而 MD-2 调控 TLR4 信号传导过程[31]。LPS 可激活 TLR4/MD-2 复合体[32]。为了进一步研究 TLR4/MD-2 是否参与 BMI-1对 THP-1-CM 介导的侵袭和 EMT 的作用，本实验发现经 THP-1-CM 处理后的HT29 中，相对于对照组，TLR4/MD-2 复合体和 MyD88 表达显著增加（TLR4：
图 3：研究 BMI-1 基因在 TLR4/MD-2/MyD88 复合体介导的 NF-κB 信号通路中的作用。图 A 和图 B 表示western blot 检测不同实验组 TLR4、MD-2 和 MyD88 蛋白的表达。图 C 和图 D 表示 western blot 检测 NF-κB p65、p-NF-κB p65 和 IκBα蛋白的表达。GAPDH 作为内参照。计量资料用均值±标准差表示。至少进行三次独立实验。*为与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。#为与 THP-1-CM+sh-NC 组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。讨论许多临床研究和实验研究表明炎症微环境对肿瘤发展和转移起重要作用[33]。肿瘤微环境包含活跃的免疫细胞浸润、巨噬细胞释放前炎症因子介导这些炎症反应[34]。因为巨噬细胞是产生前炎症因子的主要来源，包括 IL-6、IL-1β和 TNF-α。研究发现，应用 LPS 刺激 THP-1 细胞制作的条件培养基能在体外很好的模仿炎症微环境[34]。本实验表明 THP-1-CM 相对于空白对照组、LPS 组和 THP-1组，可显著增加 IL-6、IL-1β和 TNF-αmRNA 和蛋白质的生成。并且，THP-1-CM也可促进细胞侵袭和 EMT，但对细胞增殖能力无明显影响。这些实验结果与国外报道相符合[9]。而且 THP-1-CM 可显著促进 TLR4/MD-2/MyD88 复合体表达及
【参考文献】：
期刊论文
[1]结直肠癌淋巴结转移相关基因标志物的筛选[J]. 姚雨江,谢妮,刘丽桃,李仲航,万丽丽,朱婷. 癌变·畸变·突变. 2015(05)
[2]RNAi抑制人大肠癌LOVO细胞Bmi-1基因的表达[J]. 卢敏,沙卫红,王启仪. 现代消化及介入诊疗. 2011(06)
[3]siRNA介导人结肠癌细胞诱骗受体3基因表达抑制的研究[J]. 易浔飞,兰小鹏. 实用医学杂志. 2009(07)
[4]Bmi-1基因过度表达与胃癌分化、转移及预后的关系[J]. 黄开红,刘建化,李学先,宋立兵,曾木圣. 南方医科大学学报. 2007(07)
[5]Bmi-1在乳腺癌组织中的表达及意义[J]. 冯艳,宋立兵,郭宝红,廖雯婷,李满枝,刘万里,曾木圣,张玲. 癌症. 2007(02)
本文编号：2908785
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
建立炎症环境
图 2：研究 BMI-1 基因在 LPS 介导的结直肠癌细胞侵袭和 EMT 中的作用。HT-29 细胞先经 THP-1-CM 处理。MTT 用于评价经 THP-1-CM 处理后 HT-29（A）的增殖能力。Transwell 小室检测 HT-29（B）细胞侵袭能力。western blot 检测 HT-29（C 和 D）中 E-cadherin、N-cadherin 和 vimentin 蛋白的表达。GAPDH 作为内参照。光谱分析法定量测定蛋白质表达。计量资料用均值±标准差表示。至少进行三次独立实验。*为与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。#为与 THP-1-CM+sh-NC 组比较，差异有统计学意义（P <0.05）。3．沉默 BMI-1 可抑制 TLR4/MD-2/MyD88 复合体介导的 NF-κB 信号通路TLR4 在肿瘤侵袭过程中起重要作用，而 MD-2 调控 TLR4 信号传导过程[31]。LPS 可激活 TLR4/MD-2 复合体[32]。为了进一步研究 TLR4/MD-2 是否参与 BMI-1对 THP-1-CM 介导的侵袭和 EMT 的作用，本实验发现经 THP-1-CM 处理后的HT29 中，相对于对照组，TLR4/MD-2 复合体和 MyD88 表达显著增加（TLR4：
图 3：研究 BMI-1 基因在 TLR4/MD-2/MyD88 复合体介导的 NF-κB 信号通路中的作用。图 A 和图 B 表示western blot 检测不同实验组 TLR4、MD-2 和 MyD88 蛋白的表达。图 C 和图 D 表示 western blot 检测 NF-κB p65、p-NF-κB p65 和 IκBα蛋白的表达。GAPDH 作为内参照。计量资料用均值±标准差表示。至少进行三次独立实验。*为与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。#为与 THP-1-CM+sh-NC 组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。讨论许多临床研究和实验研究表明炎症微环境对肿瘤发展和转移起重要作用[33]。肿瘤微环境包含活跃的免疫细胞浸润、巨噬细胞释放前炎症因子介导这些炎症反应[34]。因为巨噬细胞是产生前炎症因子的主要来源，包括 IL-6、IL-1β和 TNF-α。研究发现，应用 LPS 刺激 THP-1 细胞制作的条件培养基能在体外很好的模仿炎症微环境[34]。本实验表明 THP-1-CM 相对于空白对照组、LPS 组和 THP-1组，可显著增加 IL-6、IL-1β和 TNF-αmRNA 和蛋白质的生成。并且，THP-1-CM也可促进细胞侵袭和 EMT，但对细胞增殖能力无明显影响。这些实验结果与国外报道相符合[9]。而且 THP-1-CM 可显著促进 TLR4/MD-2/MyD88 复合体表达及
【参考文献】：
期刊论文
[1]结直肠癌淋巴结转移相关基因标志物的筛选[J]. 姚雨江,谢妮,刘丽桃,李仲航,万丽丽,朱婷. 癌变·畸变·突变. 2015(05)
[2]RNAi抑制人大肠癌LOVO细胞Bmi-1基因的表达[J]. 卢敏,沙卫红,王启仪. 现代消化及介入诊疗. 2011(06)
[3]siRNA介导人结肠癌细胞诱骗受体3基因表达抑制的研究[J]. 易浔飞,兰小鹏. 实用医学杂志. 2009(07)
[4]Bmi-1基因过度表达与胃癌分化、转移及预后的关系[J]. 黄开红,刘建化,李学先,宋立兵,曾木圣. 南方医科大学学报. 2007(07)
[5]Bmi-1在乳腺癌组织中的表达及意义[J]. 冯艳,宋立兵,郭宝红,廖雯婷,李满枝,刘万里,曾木圣,张玲. 癌症. 2007(02)
本文编号：2908785
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