SUMO化修饰Wnt/β-catenin通路对多发性骨髓瘤细胞的生物学效应及其机制研究

发布时间：2020-12-12 00:01

　　【研究背景及目的】多发性骨髓瘤是一种恶性浆细胞疾病,目前为血液系统第二大恶性肿瘤。它以血液和尿液中单克隆免疫球蛋白为特征,发病机制尚不明确。该疾病至今无法治愈,几乎全部的多发性骨髓瘤患者最后都会复发。患者虽然可获益于以新型蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂为代表的靶向药物,但对靶向药物的耐药日益增加,逐渐成为骨髓瘤治疗的难题。深入了解多发性骨髓瘤的发病机制,针对引起骨髓瘤发生发展的关键通路研发新型靶向药物,已经成为多发性骨髓瘤治疗的当务之急。SUMO化修饰是一种重要的蛋白翻译后修饰体系,可调节底物蛋白多种生物学功能。与正常浆细胞相比,多发性骨髓瘤细胞中SUMO化修饰程度显著增加,与多发性骨髓瘤患者预后不良相关,但具体机制尚不明确。本课题组前期研究发现,多发性骨髓瘤中经典Wnt/β-catenin通路高度激活,可促进骨髓瘤细胞过度增殖以及对骨髓瘤治疗中经典靶向药物硼替佐米产生耐药。为探寻SUMO化修饰是否通过Wnt/β-catenin通路影响骨髓瘤细胞生物学特性,我们以骨髓瘤细胞株NCI-H929和RPMI-8226为研究对象,SUMO-1小干扰RNA为工具,检测抑制SUMO化修饰对Wnt/β-... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

正常骨髓浆细胞及原代多发性骨髓瘤细胞中SUMO表达水平

随后,我们体外培养了7个骨髓瘤细胞株(LP-1,SKO,CZ-1,RPMI-8226,NCI-H929,KM-3和U266)和1个浆细胞白血病细胞株ARH-77,,通过western blot的方法检测发生SUMO化修饰水平,从中选择表达水平较高的骨髓瘤细胞株(RPMI-8226和NCI-H929)作为进一步研究对象(图1-2)。2、检测SUMO-1 si RNA对多发性骨髓瘤细胞的干扰效率

首先采用带有Cy3荧光标记的阴性对照si RNA转染多发性骨髓瘤细胞NCI-H929,选取3个不同的si RNA浓度30n M,50n M,100n M。24小时后在荧光显微镜下观察。标记有红色荧光的骨髓瘤细胞被认为转染成功,50n M浓度时转染效率超过90%,在100n M浓度时转染效率最高,且细胞状态正常(图1-3)。后续试验中选用100n M为常规si RNA使用浓度。通过Real-time PCR方法检测SUMO-1基因的m RNA表达水平,以转染阴性对照si RNA组为对照,比较各组SUMO-1基因m RNA水平变化。其中第三组干扰序列对SUMO-1 m RNA表达的抑制效率最高,可达到80%(图1-4)。**:p<0.01


本文编号：2911466