张应变力响应的microRNAs在肝癌细胞增殖中的作用及生物信息学分析
发布时间：2020-12-16 16:34
研究背景与目的肝炎-肝硬化-肝癌被认为是肝癌发生过程中“三部曲”。临床大量资料显示,大多数肝癌患者有肝纤维化或肝硬化背景,且伴肝硬化背景的肝癌患者中位生存期下降,肝窦内压力增加及肝硬化促进肝癌进展。研究发现肝脏硬度可作为肝癌发生的独立危险因素,患者肝纤维化程度越重,肝癌肝内转移率也越高,说明肝纤维化与肝癌细胞增殖及侵袭转移间也存在非常重要的关系。门脉高压时,肝窦内压力大幅增加,肝窦显著扩张,肝细胞受到了肝窦压力和肝窦扩张后的张应变力等生物力学因素直接或间接的作用。但是,肝纤维化所致张应变力的变化对肝癌细胞的影响及其相关机制,如牵涉到的MicroRNAs（miRNAs）等未见报道。众所周知,miRNA是一种长2123核苷酸的非编码RNA分子,在调控细胞增殖、分化和凋亡中起着重要的作用。一些研究发现miRNAs同时与张应变力和肝癌均有关系。所以本研究运用流式细胞术及cck-8,Brdu等方法测定张应变力对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖的影响。使用Agilent单色标记芯片实验筛选差异表达MicroRNAs,再使用RT-PCR证实。并运用GO和Pathway分析基因。为...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Flexercell细胞张应变力加载系统组成及工作原理图
取培养中的对数期生长 HepG2 细胞，用含有 EDTA 的 0.125％胰酶液消化细胞并计数后，按 1×106/孔的细胞数种在 BioFlex 六孔板上，过夜，使细胞完全贴壁。3. 培养细胞用含10％FBS的 DMEM 培养，一天后镜下观察细胞生长情况，当达到每孔约80％密度时，进行下一步。4. 细胞同步化将旧细胞培养基吸出，加入不含 FBS 的 DMEM，进行同步化 24 小时。5. 安装装置将同步化完毕的实验组和对照组 BioFlex 板同时置于张应变力实验专用的 CO2培养箱内，将实验组 BioFlex 板小心安置在基台上，使用密封圈封闭好(可同时对 4 块BioFlex 板进行张应变力加载，若实验组不足 4 块，使用空板补齐)，连接好出、进气管。6. 施加张应变力开启真空泵和控制器后，启动计算机控制软件，按照相应实验要求设置张应变力参数(图 2)，开始施加张应变力。
张应变力响应的 microRNAs 在肝癌细胞增殖中的作用及生物信息学分结 果在本章实验中，我们使用张应变力加载 HepG2 细胞，共有三个可调节参数：变幅度、张应变频率、张应变时间。通过固定其中两个参数，变化另一个参数以此参数下的张应变对肝癌 HepG2 细胞的影响。然后通过流式细胞术对张应变力组和对照组进行细胞增殖率的检验。结果如下：、 I 型鼠尾胶原包被 Flexcell 六孔板效果由于没有 HepG2 细胞种植于 BioFlex 六孔板的相关文献报道，本次实验试用了多法包被 BioFlex 六孔板，包括：泡稀盐酸、泡酒精、泡 84 消毒液或者泡无菌水行明胶包被，均效果不佳，后来询问 Flexcell 公司技术人员，其建议尝试 I 型鼠原包被，结果如下：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Downregulation of miR-503 Promotes ESCC Cell Proliferation,Migration,and Invasion by Targeting Cyclin D1[J]. Lanfang Jiang,Zitong Zhao,Leilei Zheng,Liyan Xue,Qimin Zhan,Yongmei Song. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2017(03)
[2]在高血压动脉重建中microRNA-21对血管平滑肌细胞细胞外基质表达的调控作用[J]. 沈宝荣,姚庆苹,吴广亮,齐颖新,姜宗来. 医用生物力学. 2015(01)
[3]人前列腺癌细胞原代培养及纯化培养的体外药敏试验[J]. 卜强,蒋华,虞小明. 药学与临床研究. 2013(01)
[4]高强度周期性牵张应力促进体外培养成肌细胞凋亡的机制探讨[J]. 谭家莉,匡威,段建民,毕媛,汪维建,李潇,段银钟,刘彦普. 临床口腔医学杂志. 2011(09)
[5]牵张应力特征和成骨细胞生物学效应的体外研究现状[J]. 韩磊,唐国华. 中国口腔颌面外科杂志. 2009(02)
[6]机械刺激对肝癌细胞形态及增殖周期的影响[J]. 黄岂平,王红兵,卢晓,秦建,王远亮,蔡绍皙. 中国生物医学工程学报. 2004(01)
[7]肝癌细胞形态和生长行为对基底拉伸的响应[J]. 王红兵,黄岂平,秦建,卢晓,王远亮,蔡绍皙. 重庆大学学报(自然科学版). 2002(09)
硕士论文
[1]基底拉伸和压缩加载对肝癌细胞接触抑制丧失生长行为的影响[D]. 杨晓栋.重庆大学 2008
本文编号：2920450
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Flexercell细胞张应变力加载系统组成及工作原理图
取培养中的对数期生长 HepG2 细胞，用含有 EDTA 的 0.125％胰酶液消化细胞并计数后，按 1×106/孔的细胞数种在 BioFlex 六孔板上，过夜，使细胞完全贴壁。3. 培养细胞用含10％FBS的 DMEM 培养，一天后镜下观察细胞生长情况，当达到每孔约80％密度时，进行下一步。4. 细胞同步化将旧细胞培养基吸出，加入不含 FBS 的 DMEM，进行同步化 24 小时。5. 安装装置将同步化完毕的实验组和对照组 BioFlex 板同时置于张应变力实验专用的 CO2培养箱内，将实验组 BioFlex 板小心安置在基台上，使用密封圈封闭好(可同时对 4 块BioFlex 板进行张应变力加载，若实验组不足 4 块，使用空板补齐)，连接好出、进气管。6. 施加张应变力开启真空泵和控制器后，启动计算机控制软件，按照相应实验要求设置张应变力参数(图 2)，开始施加张应变力。
张应变力响应的 microRNAs 在肝癌细胞增殖中的作用及生物信息学分结 果在本章实验中，我们使用张应变力加载 HepG2 细胞，共有三个可调节参数：变幅度、张应变频率、张应变时间。通过固定其中两个参数，变化另一个参数以此参数下的张应变对肝癌 HepG2 细胞的影响。然后通过流式细胞术对张应变力组和对照组进行细胞增殖率的检验。结果如下：、 I 型鼠尾胶原包被 Flexcell 六孔板效果由于没有 HepG2 细胞种植于 BioFlex 六孔板的相关文献报道，本次实验试用了多法包被 BioFlex 六孔板，包括：泡稀盐酸、泡酒精、泡 84 消毒液或者泡无菌水行明胶包被，均效果不佳，后来询问 Flexcell 公司技术人员，其建议尝试 I 型鼠原包被，结果如下：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Downregulation of miR-503 Promotes ESCC Cell Proliferation,Migration,and Invasion by Targeting Cyclin D1[J]. Lanfang Jiang,Zitong Zhao,Leilei Zheng,Liyan Xue,Qimin Zhan,Yongmei Song. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2017(03)
[2]在高血压动脉重建中microRNA-21对血管平滑肌细胞细胞外基质表达的调控作用[J]. 沈宝荣,姚庆苹,吴广亮,齐颖新,姜宗来. 医用生物力学. 2015(01)
[3]人前列腺癌细胞原代培养及纯化培养的体外药敏试验[J]. 卜强,蒋华,虞小明. 药学与临床研究. 2013(01)
[4]高强度周期性牵张应力促进体外培养成肌细胞凋亡的机制探讨[J]. 谭家莉,匡威,段建民,毕媛,汪维建,李潇,段银钟,刘彦普. 临床口腔医学杂志. 2011(09)
[5]牵张应力特征和成骨细胞生物学效应的体外研究现状[J]. 韩磊,唐国华. 中国口腔颌面外科杂志. 2009(02)
[6]机械刺激对肝癌细胞形态及增殖周期的影响[J]. 黄岂平,王红兵,卢晓,秦建,王远亮,蔡绍皙. 中国生物医学工程学报. 2004(01)
[7]肝癌细胞形态和生长行为对基底拉伸的响应[J]. 王红兵,黄岂平,秦建,卢晓,王远亮,蔡绍皙. 重庆大学学报(自然科学版). 2002(09)
硕士论文
[1]基底拉伸和压缩加载对肝癌细胞接触抑制丧失生长行为的影响[D]. 杨晓栋.重庆大学 2008
本文编号：2920450
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