外泌体介导的CLIC1转运对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR耐药性的影响
发布时间：2020-12-21 03:22
目的:化疗耐药是胃癌（尤其晚期胃癌）患者治疗失败最常见和最难克服的问题之一,也是肿瘤复发、转移的主要原因。本课题组前期研究发现CLIC1的表达水平与胃癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期及侵袭与迁移能力密切相关,CLIC1是胃癌基因治疗的一个潜在的靶点。前期实验发现CLIC1在胃癌耐药细胞SGC-7901/VCR和其分泌的外泌体中高表达。我们推测CLIC1可能和肿瘤耐药相关。因此,本课题通过提取SGC-7901/VCR的外泌体作用于正常胃癌细胞SGC-7901,检测其对长春新碱的耐药情况和CLIC1表达水平的改变,同时沉默CLIC1基因在SGC-7901/VCR中的表达来检测该细胞对长春新碱的耐药情况,和外泌体中CLIC1对胃癌耐药的作用。方法:CCK-8测定SGC-7901和SGC-7901/VCR对长春新碱的耐药性,qRT-PCR测定SGC-7901和SGC-7901/VCR中CLIC1基因的表达情况;Western Blot和免疫荧光测定SGC-7901和SGC-7901/VCR中CLIC1蛋白的表达情况。提取SGC-7901/VCR和SGC-7901的外泌体,在电子显微镜下鉴定外泌体的...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A.耐药细胞（SGC-7901/VCR）和敏感细胞（SGC-7901）的CLIC1蛋白表达；B.耐药细胞
胃癌敏感细胞（SGC-7901）和耐药细胞细胞（SGC-7901/VCR）的 CLIC1 蛋白表达分析（igure. 4. Analysis of CLIC1 protein expression in gastric cancer-sensitive cells (SGC-7901) andrug-resistant cell lines (SGC-7901/VCR)（200um）2. SGC-7901/VCR 分泌的外泌体量大于 SGC-7901分别提取耐药细胞 SGC-7901/VCR 和胃癌细胞 SGC-7901 细液，超速离心法得到的外泌体 V-exo 和 7901-exo，BCA 法测定 SG和 SGC-7901/VCR 外泌体蛋白浓度分别为 5.32±0.78 mg/ml 和 2.4mg/ml。 (P＜0.05 图 5A)。用 Western blot 通过外泌体标记蛋白 H（内参 GAPDH）来鉴定外泌体（图 5B）；并用透射电镜鉴定外泌态和大小（图 5C）。同时 qRT-PCR 结果显示 V-exo 中 CLIC1 基因是 7901-exo 的 1.46±0.23 倍（图 6），和细胞检测结果相一致。
敏感细胞(SGC-7901)外泌体的鉴定。(A)每 180mL 细胞上的含量（注:* 与正常组比较 p<0.05）记蛋白 HSP-70 的表达(内参为 GAPDH)。(C)透射电镜图像字标 2 是 SGC-7901/VCR。drug-resistant (SGC-7901/VCR) exosomes and sensitive cellsd SGC-7901/VCR exosomes per 180 mL of cell supernatantroup); (B) Western blot: SGC-7901/VCR Expression ofosomes (GAPDH as an internal reference). (C) TEM imagenumber 2 is SGC-7901/VCR
【参考文献】：
期刊论文
[1]Function of chloride intracellular channel 1 in gastric cancer cells[J]. Peng-Fei Ma,Jun-Qiang Chen,Zhen Wang,Jin-Lu Liu,BoPei Li,Department of Gastrointestinal Surgery,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China. World Journal of Gastroenterology. 2012(24)
[2]影响5-FU疗效的研究进展[J]. 韩勇,寿成超. 中国肿瘤临床. 2010(21)
本文编号：2929089
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A.耐药细胞（SGC-7901/VCR）和敏感细胞（SGC-7901）的CLIC1蛋白表达；B.耐药细胞
胃癌敏感细胞（SGC-7901）和耐药细胞细胞（SGC-7901/VCR）的 CLIC1 蛋白表达分析（igure. 4. Analysis of CLIC1 protein expression in gastric cancer-sensitive cells (SGC-7901) andrug-resistant cell lines (SGC-7901/VCR)（200um）2. SGC-7901/VCR 分泌的外泌体量大于 SGC-7901分别提取耐药细胞 SGC-7901/VCR 和胃癌细胞 SGC-7901 细液，超速离心法得到的外泌体 V-exo 和 7901-exo，BCA 法测定 SG和 SGC-7901/VCR 外泌体蛋白浓度分别为 5.32±0.78 mg/ml 和 2.4mg/ml。 (P＜0.05 图 5A)。用 Western blot 通过外泌体标记蛋白 H（内参 GAPDH）来鉴定外泌体（图 5B）；并用透射电镜鉴定外泌态和大小（图 5C）。同时 qRT-PCR 结果显示 V-exo 中 CLIC1 基因是 7901-exo 的 1.46±0.23 倍（图 6），和细胞检测结果相一致。
敏感细胞(SGC-7901)外泌体的鉴定。(A)每 180mL 细胞上的含量（注:* 与正常组比较 p<0.05）记蛋白 HSP-70 的表达(内参为 GAPDH)。(C)透射电镜图像字标 2 是 SGC-7901/VCR。drug-resistant (SGC-7901/VCR) exosomes and sensitive cellsd SGC-7901/VCR exosomes per 180 mL of cell supernatantroup); (B) Western blot: SGC-7901/VCR Expression ofosomes (GAPDH as an internal reference). (C) TEM imagenumber 2 is SGC-7901/VCR
【参考文献】：
期刊论文
[1]Function of chloride intracellular channel 1 in gastric cancer cells[J]. Peng-Fei Ma,Jun-Qiang Chen,Zhen Wang,Jin-Lu Liu,BoPei Li,Department of Gastrointestinal Surgery,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China. World Journal of Gastroenterology. 2012(24)
[2]影响5-FU疗效的研究进展[J]. 韩勇,寿成超. 中国肿瘤临床. 2010(21)
本文编号：2929089
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/2929089.html
