H3K4AC、H3K27AC在胃癌中的表达及与Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路之间关系的研究
发布时间：2021-01-06 07:18
目的肿瘤的形成是机体在受到多种不良因素的影响后局部组织异常增殖所形成的新生物。其中恶性肿瘤目前对人类健康的危害已经众所周知,由于缺乏特异性地早期诊断,很多肿瘤在确诊时已处于晚期,患者术后5年生存率仍然处于较低水平。因此,从分子水平揭示肿瘤的发生发展机制,对于肿瘤的早期诊断以及为治疗恶性肿瘤提供新的方向具有重大临床意义。近年来研究表明,肿瘤的发生不仅涉及到遗传学的改变,同时表观遗传学在肿瘤的发生发展中亦有重要作用。前者是指由于基因序列的改变而导致的基因水平的变化,而后者是在不涉及核苷酸序列变化的基础上基因发生的可逆的、可遗传的变化。组蛋白修饰是表观遗传学的重要组成部分,其中组蛋白乙酰化与去乙酰化修饰是目前研究较多的一种修饰方式,组蛋白乙酰化状态的失衡参与了肿瘤的发生发展过程。但是关于组蛋白乙酰化修饰与细胞信号通路之间的关系目前研究尚不深入。本实验中,首先通过组织芯片免疫组化的方法研究胃腺癌中H3K4AC和H3K27AC的表达情况,然后通过调控Wnt/β-catenin及PI3K/Akt信号通路的活性来检测H3K4AC和H3K27AC在不同肿瘤细胞系中表达水平的变化,为肿瘤的防治提供新的思...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
H3K4AC和H3K27AC在正常胃黏膜组织及不同病理级别胃腺癌中的表
酰化相关[24]，组蛋白乙酰化作用示意图如图1.2所示。研究表明组蛋白修饰程度的高低可用于预测肿瘤的预后。研究发现在胃癌组织中H3K9的乙酰化水平高低与胃癌的分化程度及病理分型有关，并且胃癌中组蛋白H4乙酰化水平显著下调，这与肿瘤分期、淋巴结转移及浸润深度有直接联系，表明组蛋白乙酰化的下调可能参与了胃癌的侵袭和迁移过程[25]。图 1.2 组蛋白乙酰化与基因表达（摘自“Altered Histone Modifications inGliomas”）组织芯片（tissue chip），是在同一张载玻片上有多个规律排列的不同个体的组织标本，我们可以对这些不同个体的标本进行同一指标的研究。由于芯片上的组织样本实验条件完全一致，因此具有极好的质量控制，大大减少了实验中因实验条件变化而导致结果出现偏差的概率。使用组织芯片可以进行染色体原位杂交、免疫组化和原位聚合酶链反应等多种分子检测，目前已经被用于包括肿瘤学在内的多个研究领域。赵凤娟等曾利用组织芯片免疫组化的方法检测了正常胃黏膜、癌旁组织以及高、中、低分化腺癌中 MMP-9 的表达变化
使所需的目的蛋白显示条带，拍照保存。8.结果分析：目的条带灰度值分析使用的是Image J 软件，因Histone3蛋白在细胞核内的表达较其他蛋白稳定，在分析时作为内参进行校正。对目的蛋白条带和内参条带的灰度值进行比较可以用于表示目的蛋白表达水平的高低。2.1.4.4 统计学处理：数据分析统计软件使用的是SPSS 18.0，数据分析结果用平均数±标准差来表示（x ±s），认为P＜0.05为差异有统计学意义。2.2 结果1.核蛋白浓度的测量：根据酶标仪读取96孔板中标准品的数值并绘制出标准曲线，曲线系数接近于1，表明蛋白样品浓度值测量较为精确。2.Western-blot检测在加入不同浓度Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535及在不同作用时间下两种胃癌细胞MGC-803和BGC-823中H3K4AC和H3K27AC的表达，结果显示，药物作用浓度加大或者作用时间延长，都可以使H3K4AC和H3K27AC的表达下调，差异有统计学意义（P﹤0.05）（图2.1）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]The PI3K/AKT Pathway and Renal Cell Carcinoma[J]. Huifang Guo,Peter German,Shanshan Bai,Sean Barnes,Wei Guo,Xiangjie Qi,Hongxiang Lou,Jiyong Liang,Eric Jonasch,Gordon B.Mills,Zhiyong Ding. Journal of Genetics and Genomics. 2015(07)
[2]Circulating biomarkers of hepatocellular carcinoma response after locoregional treatments: New insights[J]. Maria Tampaki,Polyxeni P Doumba,Melanie Deutsch,John Koskinas. World Journal of Hepatology. 2015(14)
[3]Role of the Wnt/β-catenin pathway in gastric cancer: An indepth literature review[J]. Miguel Angel Chiurillo. World Journal of Experimental Medicine. 2015(02)
[4]Epigenetics: An emerging player in gastric cancer[J]. Changwon Kang,Ji-Joon Song,Jaeok Lee,Mi Young Kim. World Journal of Gastroenterology. 2014(21)
[5]Decreased histone H2B monoubiquitination in malignant gastric carcinoma[J]. Zi-Jing Wang,Jing-Lin Yang,Yi-Ping Wang,Jiang-Yan Lou,Jie Chen,Cong Liu,Lian-Di Guo. World Journal of Gastroenterology. 2013(44)
[6]LY294002抑制PI3K/AKT信号通路对胃腺癌SGC-7901细胞的影响[J]. 韩静,张庆瑜,康春生,谢甲贝,付彦超,张靖,马菲菲,王涛. 中国肿瘤临床. 2011(05)
[7]Re-expression of methylation-induced tumor suppressor gene silencing is associated with the state of histone modification in gastric cancer cell lines[J]. Chun-Feng Meng Xin-Jiang Zhu Guo Peng Dong-Qiu Dai Department of Surgical Oncology,The First Affiliated Hospital,China Medical University,Shenyang 110001,Liaoning Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(46)
本文编号：2960164
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
H3K4AC和H3K27AC在正常胃黏膜组织及不同病理级别胃腺癌中的表
酰化相关[24]，组蛋白乙酰化作用示意图如图1.2所示。研究表明组蛋白修饰程度的高低可用于预测肿瘤的预后。研究发现在胃癌组织中H3K9的乙酰化水平高低与胃癌的分化程度及病理分型有关，并且胃癌中组蛋白H4乙酰化水平显著下调，这与肿瘤分期、淋巴结转移及浸润深度有直接联系，表明组蛋白乙酰化的下调可能参与了胃癌的侵袭和迁移过程[25]。图 1.2 组蛋白乙酰化与基因表达（摘自“Altered Histone Modifications inGliomas”）组织芯片（tissue chip），是在同一张载玻片上有多个规律排列的不同个体的组织标本，我们可以对这些不同个体的标本进行同一指标的研究。由于芯片上的组织样本实验条件完全一致，因此具有极好的质量控制，大大减少了实验中因实验条件变化而导致结果出现偏差的概率。使用组织芯片可以进行染色体原位杂交、免疫组化和原位聚合酶链反应等多种分子检测，目前已经被用于包括肿瘤学在内的多个研究领域。赵凤娟等曾利用组织芯片免疫组化的方法检测了正常胃黏膜、癌旁组织以及高、中、低分化腺癌中 MMP-9 的表达变化
使所需的目的蛋白显示条带，拍照保存。8.结果分析：目的条带灰度值分析使用的是Image J 软件，因Histone3蛋白在细胞核内的表达较其他蛋白稳定，在分析时作为内参进行校正。对目的蛋白条带和内参条带的灰度值进行比较可以用于表示目的蛋白表达水平的高低。2.1.4.4 统计学处理：数据分析统计软件使用的是SPSS 18.0，数据分析结果用平均数±标准差来表示（x ±s），认为P＜0.05为差异有统计学意义。2.2 结果1.核蛋白浓度的测量：根据酶标仪读取96孔板中标准品的数值并绘制出标准曲线，曲线系数接近于1，表明蛋白样品浓度值测量较为精确。2.Western-blot检测在加入不同浓度Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535及在不同作用时间下两种胃癌细胞MGC-803和BGC-823中H3K4AC和H3K27AC的表达，结果显示，药物作用浓度加大或者作用时间延长，都可以使H3K4AC和H3K27AC的表达下调，差异有统计学意义（P﹤0.05）（图2.1）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]The PI3K/AKT Pathway and Renal Cell Carcinoma[J]. Huifang Guo,Peter German,Shanshan Bai,Sean Barnes,Wei Guo,Xiangjie Qi,Hongxiang Lou,Jiyong Liang,Eric Jonasch,Gordon B.Mills,Zhiyong Ding. Journal of Genetics and Genomics. 2015(07)
[2]Circulating biomarkers of hepatocellular carcinoma response after locoregional treatments: New insights[J]. Maria Tampaki,Polyxeni P Doumba,Melanie Deutsch,John Koskinas. World Journal of Hepatology. 2015(14)
[3]Role of the Wnt/β-catenin pathway in gastric cancer: An indepth literature review[J]. Miguel Angel Chiurillo. World Journal of Experimental Medicine. 2015(02)
[4]Epigenetics: An emerging player in gastric cancer[J]. Changwon Kang,Ji-Joon Song,Jaeok Lee,Mi Young Kim. World Journal of Gastroenterology. 2014(21)
[5]Decreased histone H2B monoubiquitination in malignant gastric carcinoma[J]. Zi-Jing Wang,Jing-Lin Yang,Yi-Ping Wang,Jiang-Yan Lou,Jie Chen,Cong Liu,Lian-Di Guo. World Journal of Gastroenterology. 2013(44)
[6]LY294002抑制PI3K/AKT信号通路对胃腺癌SGC-7901细胞的影响[J]. 韩静,张庆瑜,康春生,谢甲贝,付彦超,张靖,马菲菲,王涛. 中国肿瘤临床. 2011(05)
[7]Re-expression of methylation-induced tumor suppressor gene silencing is associated with the state of histone modification in gastric cancer cell lines[J]. Chun-Feng Meng Xin-Jiang Zhu Guo Peng Dong-Qiu Dai Department of Surgical Oncology,The First Affiliated Hospital,China Medical University,Shenyang 110001,Liaoning Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(46)
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