53BP1与微小染色体维持蛋白复合物参与人肝癌细胞DNA损伤修复的机制研究
发布时间：2021-01-08 05:10
研究背景及目的原发性肝癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,在全世界范围内肿瘤致死率中排名第二。据统计,我国每年死于原发性肝癌的人数占全球原发性肝癌死亡人数的50%以上,严重威胁着人们的生命健康。肝癌的发生发展是一个涉及多种病因、多个因素在多阶段参与其形成的复杂的过程。抑癌基因的突变或缺失、原癌基因的激活、细胞周期调控异常以及DNA修复相关基因的异常表达等某一环节出现修复异常可能就是正常肝细胞发生癌变的临界点,有可能成为肝细胞出现癌变的标志。因此,肿瘤细胞中DNA的损伤修复机制是治疗肿瘤的一项有有希望的途径。p53结合蛋白1（P53 binding protein 1,53BP1）是一种参与DNA损伤修复的重要传感器,在保持基因组稳定性和预防癌症的发生方面起重要作用。53BP1基因定位于人类染色体15q15-21,有11.Okb和6.6kb两种转录本,该基因编码的蛋白质由1972个氨基酸残基组成,与p53的DNA结合区结合,从而促进p53介导的基因的转录启动。53BP1生理功能广泛,它能快速地聚集在DNA双链断裂部位并形成核聚物,因此,53BP1被认为是内源性DNA双链损伤的标志物分子之一...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．肝癌细胞ＨｅｐＧ２的细胞形态
染入ＨｅｐＧ２细胞中，为明确慢病毒是否在细胞中有稳定表达，我们接下来进一??步采用ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的实验方法验证稳定细胞株ＨｅｐＧ２中５３ＢＰ１??的表达情况。如图２Ａ所示，与ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ组细胞??中５３ＢＰ１的表达明显下调（Ｐ＜０．０１），结果表明慢病毒可以下调ＨｅｐＧ２细胞??中５３ＢＰ１的ｍＲＮＡ表达达到９０％左右。我们进一步应用??细胞中５３ＢＰ１的蛋白表达水平。如图１Ｂ所示，ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ组的细胞中５３ＢＰ１??的表达水平明显低于ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０１）。通过以上研究结果证实，??ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ组的细胞中５３ＢＰ１的表达被明显下调，而对照组ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ??组的细胞没有明显变化。故我们成功构建了稳定下调５３ＢＰ１的人肝癌细胞株??ＨｅｐＧ２。因此，我们选用这两组稳定细胞株进行接下来的实验。??３１??
２．３?５３ＢＰ１抑制人肝癌细胞ＨｅｐＧ２的增殖??为了探讨５３ＢＰ１是否影响了人肝癌细胞ＨｅｐＧ２的增殖能力，我们下调??５３ＢＰ１表达之后采用ＭＴＳ的方法进行检测细胞增殖活性。如图３所示，稳定下??调５３ＢＰ１表达的ＨｅｐＧ２细胞在第３－５天增殖能力明显强于ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ。该??３２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢病毒介导沉默食管癌细胞53BP1基因表达对裸鼠移植瘤放射敏感性的研究[J]. 刘志坤,张魏丽,祝淑钗,苏景伟,李娟,沈文斌. 中国癌症杂志. 2016(07)
[2]沉默MCM7基因后肝癌SMMC-7721细胞差异表达基因的筛选[J]. 罗旺,曹骥,杨香娣,邓玲,王谷洋,杨春,李科志,李瑗. 世界华人消化杂志. 2016(10)
[3]RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究[J]. 孙雯,曹骥,卢晓旭,朱伶群,杨春,欧超,骆成飘,李瑗,苏建家. 中华肿瘤防治杂志. 2015(01)
[4]Advances in non-surgical management of primary liver cancer[J]. Xiao Chen,Hai-Peng Liu,Mei Li,Liang Qiao. World Journal of Gastroenterology. 2014(44)
[5]下调53BP1基因表达对喉部鳞癌细胞放射增敏作用的研究[J]. 苟启桁,谢钰鑫,伍艳霞,王前前,王竹,李平. 四川大学学报(医学版). 2014(05)
[6]MCM2在宫颈病变组织中的表达及意义[J]. 汪志辉,生秀杰. 实用妇产科杂志. 2014(04)
[7]微小染色体维持蛋白5在胃癌、癌前病变及正常胃黏膜组织中的表达及临床病理学意义[J]. 张磊,吴慧丽,李琨琨,肖兴国. 新乡医学院学报. 2014(03)
[8]MCM7蛋白在人 大鼠 树鼩肝癌组织中的表达和意义[J]. 朱伶群,杨春,秦虹,卢晓旭,李瑗,欧超,苏建家,曹骥. 中国肿瘤临床. 2013(16)
[9]53BP1在宫颈癌组织中的表达及其与P53和HPV感染的关系[J]. 诸海燕,金纬纬,胡燕,郑飞云. 医学研究杂志. 2013(02)
[10]53BP1在宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达[J]. 周熹,何家玉. 临床与实验病理学杂志. 2012(07)
本文编号：2963977
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：120 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．肝癌细胞ＨｅｐＧ２的细胞形态
染入ＨｅｐＧ２细胞中，为明确慢病毒是否在细胞中有稳定表达，我们接下来进一??步采用ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的实验方法验证稳定细胞株ＨｅｐＧ２中５３ＢＰ１??的表达情况。如图２Ａ所示，与ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ组细胞??中５３ＢＰ１的表达明显下调（Ｐ＜０．０１），结果表明慢病毒可以下调ＨｅｐＧ２细胞??中５３ＢＰ１的ｍＲＮＡ表达达到９０％左右。我们进一步应用??细胞中５３ＢＰ１的蛋白表达水平。如图１Ｂ所示，ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ组的细胞中５３ＢＰ１??的表达水平明显低于ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ组（Ｐ＜０．０１）。通过以上研究结果证实，??ｓｈＲＮＡ－５３ＢＰｌ组的细胞中５３ＢＰ１的表达被明显下调，而对照组ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ??组的细胞没有明显变化。故我们成功构建了稳定下调５３ＢＰ１的人肝癌细胞株??ＨｅｐＧ２。因此，我们选用这两组稳定细胞株进行接下来的实验。??３１??
２．３?５３ＢＰ１抑制人肝癌细胞ＨｅｐＧ２的增殖??为了探讨５３ＢＰ１是否影响了人肝癌细胞ＨｅｐＧ２的增殖能力，我们下调??５３ＢＰ１表达之后采用ＭＴＳ的方法进行检测细胞增殖活性。如图３所示，稳定下??调５３ＢＰ１表达的ＨｅｐＧ２细胞在第３－５天增殖能力明显强于ｓｈＲＮＡ－ｃｏｎｔｒｏｌ。该??３２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢病毒介导沉默食管癌细胞53BP1基因表达对裸鼠移植瘤放射敏感性的研究[J]. 刘志坤,张魏丽,祝淑钗,苏景伟,李娟,沈文斌. 中国癌症杂志. 2016(07)
[2]沉默MCM7基因后肝癌SMMC-7721细胞差异表达基因的筛选[J]. 罗旺,曹骥,杨香娣,邓玲,王谷洋,杨春,李科志,李瑗. 世界华人消化杂志. 2016(10)
[3]RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究[J]. 孙雯,曹骥,卢晓旭,朱伶群,杨春,欧超,骆成飘,李瑗,苏建家. 中华肿瘤防治杂志. 2015(01)
[4]Advances in non-surgical management of primary liver cancer[J]. Xiao Chen,Hai-Peng Liu,Mei Li,Liang Qiao. World Journal of Gastroenterology. 2014(44)
[5]下调53BP1基因表达对喉部鳞癌细胞放射增敏作用的研究[J]. 苟启桁,谢钰鑫,伍艳霞,王前前,王竹,李平. 四川大学学报(医学版). 2014(05)
[6]MCM2在宫颈病变组织中的表达及意义[J]. 汪志辉,生秀杰. 实用妇产科杂志. 2014(04)
[7]微小染色体维持蛋白5在胃癌、癌前病变及正常胃黏膜组织中的表达及临床病理学意义[J]. 张磊,吴慧丽,李琨琨,肖兴国. 新乡医学院学报. 2014(03)
[8]MCM7蛋白在人 大鼠 树鼩肝癌组织中的表达和意义[J]. 朱伶群,杨春,秦虹,卢晓旭,李瑗,欧超,苏建家,曹骥. 中国肿瘤临床. 2013(16)
[9]53BP1在宫颈癌组织中的表达及其与P53和HPV感染的关系[J]. 诸海燕,金纬纬,胡燕,郑飞云. 医学研究杂志. 2013(02)
[10]53BP1在宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达[J]. 周熹,何家玉. 临床与实验病理学杂志. 2012(07)
本文编号：2963977
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