沉默NUPR1对人多发性骨髓瘤细胞自噬的影响及机制研究

发布时间：2021-01-09 05:06

　　目的多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）是恶性浆细胞增殖性疾病,自噬调控与MM发生发展密切相关,而AKT/mTOR通路是自噬调控的重要通路。核蛋白1（Nuclearprotein 1,NUPR1）作为一种多功能小分子蛋白,可参与不同的信号转导通路,调控多种肿瘤细胞周期、凋亡和自噬等,进而影响肿瘤的生存和进展。本研究将探讨沉默NUPR1对人多发性骨髓瘤U266和RPMI8226细胞自噬的影响及可能机制,旨为MM防治研究开拓新思路。方法①以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测人多发性骨髓瘤 U266 和RPMI8226 细胞 NUPR1 和自噬相关基因（ATG5、Beclin1）mRNA 水平;②构建靶向抑制NUPR1基因表达的shRNA并包装慢病毒载体,转染人多发性骨髓瘤U266和RPMI8226细胞株。实验分为未转染组、阴性对照组和干扰组。③透射电子显微镜（TEM）观察自噬小体。④Western Blot检测NUPR1干扰效果、自噬相关指标（ATG5、Beclin1、P62、LC... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：39 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１正常人骨髓单个核细胞及人骨髓瘤细胞ＮＵＰＲｌ、Ｂｅｃｌｉｎｌ及ＡＴＧ５?ｍＲＮＡ相对表达量??

２．２?ＮＵＰＲｌ－ｓｈＲＮＡ?慢病毒转染?Ｕ２６６?和?ＲＰＭＩ８２２６?细胞??ＮＵＰＲｌ－ｓｈＲＮＡ慢病毒转染Ｕ２６６和ＲＰＭＩ８２２６细胞后，细胞荧光表达较强，??流式细胞术结果显示，转染效率可达９０％。（图２）??１３??

ＮＵＰＲｌ－ｓｈＲＮＡ慢病毒转染Ｕ２６６和ＲＰＭＩ８２２６细胞后，透射电镜下观察自噬??小体（白色箭头所指）明显少于未转染组和阴性对照组。而未转染组与阴性对照??组无统计学差异。（图４）??１５??


本文编号：2966028