LSD1与SIN3A/HDAC复合体协同作用并维持乳腺癌对化疗的敏感性

发布时间：2021-01-10 00:23

　　实验目的SIN3A是转录抑制复合体SIN3A/HDAC的核心组分,通过其组蛋白去乙酰化酶活性降低细胞内组蛋白乙酰化水平从而调控基因的表达,参与到许多生物学过程中,例如细胞增殖、细胞凋亡、分化、哺乳动物发育和体内稳态调节等。但是SIN3A/HDAC复合体在乳腺癌发生发展中所发挥的生物学功能仍不够明确,为了进一步探究其在乳腺癌发生发展中的相互作用蛋白及机制,我们进行了以下研究。实验方法1.在乳腺癌MCF-7细胞系中稳定表达FLAG-SIN3A的质粒,通过免疫亲和纯化和银染质谱测序分析鉴定SIN3A的体内相互作用蛋白,并用蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀和快速蛋白液相色谱对上述的蛋白之间相互作用进行验证。采用GST pull-down实验探究直接相互作用蛋白的机制,并利用体外酶活性实验分析复合体的酶活性。2.在乳腺癌MCF-7细胞中利用Ch IP-on-chip在全基因组范围内寻找出LSD1/SIN3A/HDAC复合体可能的共同调控的下游靶基因,通过KEGG对这些靶基因进行通路分析,并使用Ch IP-PCR和q Ch IP实验对Ch IP-on-chip结果进行验证。3.采用细胞生长曲线、平板克隆... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

SIN3A结合蛋白的免疫亲和纯化分析

一、LSD1 与 SIN3A/HDAC 复津医科大学博士学位论文 合体具有体内直接相互作用为了进一步证实LSD1和SIN3A/HDAC复合体在体内存在相互作用，我们采快速液相色谱（FPLC）实验，首先提取MCF-7细胞的全核蛋白，浓缩并用BS置换溶液介质，随后将蛋白质经凝胶过滤预装柱 Superose 6进行分离，收流出组分，进行Western blotting检测，结果如图1.2所示，LSD1和IN3A/HDAC复合体核心组分SIN3A, HDAC1, HDAC2, RbAp46/48, SAP 180,AP130, and SAP30的主峰都出现在669-2000kDa之间，且流出峰相似有很大程的重合，这提示LSD1和SIN3A/HDAC复合体在体内存在相互作用，它们三者一个有机整体。

一、LSD1 与 S士学位论文 合体具有体内，再用 LSD1 抗体进行免疫印迹检测，也显示出同样癌 T-47D 细胞系的全细胞裂解液重复以上实验，进时也得到了与 MCF-7 细胞系中一致的结果（图 1.3验结果都有力地证明了 LSD1 在体内与 SIN3A/HDA于 SIN3A/HDAC 复合体的成分之一。

【参考文献】：
期刊论文
[1]端粒酶催化亚单位和c-Myc蛋白在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义[J]. 张凤英,刘敬波,苑铁军,刘清明,韩在文,王树勇,张传毅,陈淑萍.  临床耳鼻咽喉科杂志. 2005(07)



本文编号：2967689