人结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu的构建及基因表达谱变化

发布时间：2021-01-10 11:55

　　目的:采用人结肠癌HT-29为亲本细胞株,持续药物浓度递增法构建人结肠癌耐药细胞株,细胞学观察肿瘤细胞生物学特性变化,全人类基因组表达谱芯片分析比较两株细胞基因表达谱差异,初步探索结肠癌细胞中可能与5-Fu耐药相关的基因,为今后进一步研究耐药机制、筛选耐药分子标记物奠定基础。方法:1.采用5-Fu持续接触浓度梯度递增法构建人结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu;2.观察耐药细胞株HT-29/5-Fu的生物学特性:观察细胞形态变化和克隆形成率;MTT法测定生长曲线和药物敏感性;Western blot分析胸苷酸合成酶（TS）、二氢嘧啶脱氢酶（DPD）的表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;3.利用全人类基因组表达谱芯片检测耐药细胞株HT-29/5-Fu及其亲本HT-29细胞差异表达的基因,并运用生物信息学的方法筛选出可能与5-Fu耐药相关的基因及通路。结果:1、历时10个月成功建立了能在1μg/m L 5-Fu浓度下稳定生长的耐药细胞株HT-29/5-Fu;2、HT-29/5-Fu耐药细胞的生物学特性发生改变,其耐药指数为3.59;与HT-29细胞相比,HT-29/5-Fu细胞形态发生... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂及材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 人结肠癌HT-29细胞的培养
        2.2.2 耐 5-Fu人结肠癌细胞株HT-29/5-Fu的建立
        2.2.3 细胞形态学观察
        2.2.4 细胞生长曲线测定
        2.2.5 平板克隆形成实验
        2.2.6 药物敏感性分析
        2.2.7 TS和DPD的表达情况分析
        2.2.8 细胞周期检测
        2.2.9 细胞凋亡检测
        2.2.10基因表达分析
    2.3 统计分析
第3章 结果
    3.1 成功建立耐药细胞株HT-29/5-Fu
    3.2 细胞形态学
    3.3 生长曲线
    3.4 克隆形成
    3.5 5-Fu敏感性
    3.6 Western blot分析TS和DPD表达
    3.7 流式细胞仪检测细胞周期
    3.8 流式细胞仪检测细胞凋亡
    3.9 芯片结果
        3.9.1 RNA质量检测
        3.9.2 基因表达谱杂交图
        3.9.3 基因表达谱散点图
        3.9.4 差异基因分析
        3.9.5 GO分析
        3.9.6 KEGG分析
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表论文、奖励
综述
    参考文献
本学期毕业博士、硕士研究生公开发表学术论文统计表


【参考文献】：
期刊论文
[1]1,3-Bis（2-chloroethyl）-1-nitrosourea enhances the inhibitory effect of Resveratrol on 5-fluorouracil sensitive/resistant colon cancer cells[J]. Dipon Das,Ranjan Preet,Purusottam Mohapatra,Shakti Ranjan Satapathy,Chanakya Nath Kundu.  World Journal of Gastroenterology. 2013(42)
[2]结直肠癌5-FU敏感性相关基因的文献计量学与生物信息学分析[J]. 李纪强,姜茂竹,曾融,麦仲伦,张积仁.  实用肿瘤杂志. 2013(05)
[3]5-Fu诱导人大肠癌SW480细胞株耐药与自噬活性的变化[J]. 胡万乐,何占红,蒋芳,刘长宝.  中国中西医结合外科杂志. 2013(03)
[4]结肠癌多药耐药性相关基因筛选与鉴定[J]. 李建芳,郑重,俞焙秦,瞿颖,朱正纲,刘炳亚.  中华胃肠外科杂志. 2012 (04)
[5]人喉癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及其生物学特性[J]. 陈婕,王家东.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(02)
[6]人结肠癌LS174T/5-Fu多药耐药细胞系的建立[J]. 陶钧,薛鹏,姚阳,赵晖.  上海交通大学学报(医学版). 2006(09)
[7]人大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株的建立及P-gp测定[J]. 布立民,孙淑红,华建平,韩英,赖靖,鲍文漪.  世界华人消化杂志. 2006(21)

硕士论文
[1]SGC-7901/5-FU人胃癌耐药细胞株的建立及基因芯片检测亲本和耐药细胞株的micro-RNA表达谱[D]. 王燕.复旦大学 2012



本文编号：2968660