PDX1真核表达载体的构建及其对PANC-1细胞PI3K/AKT信号途径的影响
发布时间：2021-01-12 03:48
目的构建胰腺十二指肠同源框蛋白1（PDX1）基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达重组体。重组体转染至PANC-1细胞中通过G418筛选出稳定表达细胞株。Western blot分析PDX1蛋白水平表达及p-AKT水平变化。结果 PDX1基因成功在PANC-1中表达。利用Western blot检测验证获得了稳定的PDX1过表达细胞株。Western blot结果显示:过表达PDX1的细胞株AKT表达含量与正常细胞及对照细胞没有区别而p-AKT水平降低。结论PDX1基因过表达能够降低PANC-1细胞的p-AKT水平。
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2017,52(02)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
PDX1基因的扩增及重组质粒构建与鉴定A:PDX1基因PCＲ扩增图;B:PDX1重组质粒酶切鉴定图;C:PDX1重组质粒部分测序结果;M:DNAMarker;1:PDX1基因全长PCＲ产
图1PDX1基因的扩增及重组质粒构建与鉴定A:PDX1基因PCＲ扩增图;B:PDX1重组质粒酶切鉴定图;C:PDX1重组质粒部分测序结果;M:DNAMarker;1:PDX1基因全长PCＲ产物;2:双酶切PCMV6-Entry质粒;3:双酶切PDX1重组质粒图2Westernblot法分析PDX1、AKT及pAKT结果1:未转染组;2:转染空质粒组;3:过表达组;与未转染组比较:*P＜0.05;与转染空质粒组比较:#P＜0.053讨论在胰腺发育过程中，PDX1决定胚胎内胚层向胰腺祖细胞发展的机制，目前还不是很清楚。由于其在胰腺中的关键作用，许多研究试图利用PDX1将相应的组织和细胞重编程为胰腺细胞系。研究［9－10］表明在人皮肤角质化细胞和人肝脏细胞中过表达PDX1细胞转变成胰腺β细胞并分泌胰岛素。PDX1是胰腺发育中的关键性调节分子，控制胰腺细胞的生长和分化，而胰腺癌细胞的显著特点是低分化。因此，在胰腺癌细胞中PDX1表达缺失可能在发病中起一定作用，本研究显示过表达PDX1下调p-AKT水平。PI3K-AKT信号通路是细胞生存信号转导下游的共有途径，该途径激活进而导致细胞增殖，抑制细胞凋亡［11－12］。AKT是一个非常重要的信号中心，其能与100多种下游物质结合进而发生作用，例如:能够与糖原合成酶激酶-3(GSK-3)结合促进葡萄糖的摄取及合成糖原来储存能量［13］。该途径具有很重要的生理学功能，在癌症中该途径活性上调。因此，PDX1过表达可能调控胰腺癌细胞的生物学行为，但其机制有待进一步研究。·188·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Feb;52(2)
图1PDX1基因的扩增及重组质粒构建与鉴定A:PDX1基因PCＲ扩增图;B:PDX1重组质粒酶切鉴定图;C:PDX1重组质粒部分测序结果;M:DNAMarker;1:PDX1基因全长PCＲ产物;2:双酶切PCMV6-Entry质粒;3:双酶切PDX1重组质粒图2Westernblot法分析PDX1、AKT及pAKT结果1:未转染组;2:转染空质粒组;3:过表达组;与未转染组比较:*P＜0.05;与转染空质粒组比较:#P＜0.053讨论在胰腺发育过程中，PDX1决定胚胎内胚层向胰腺祖细胞发展的机制，目前还不是很清楚。由于其在胰腺中的关键作用，许多研究试图利用PDX1将相应的组织和细胞重编程为胰腺细胞系。研究［9－10］表明在人皮肤角质化细胞和人肝脏细胞中过表达PDX1细胞转变成胰腺β细胞并分泌胰岛素。PDX1是胰腺发育中的关键性调节分子，控制胰腺细胞的生长和分化，而胰腺癌细胞的显著特点是低分化。因此，在胰腺癌细胞中PDX1表达缺失可能在发病中起一定作用，本研究显示过表达PDX1下调p-AKT水平。PI3K-AKT信号通路是细胞生存信号转导下游的共有途径，该途径激活进而导致细胞增殖，抑制细胞凋亡［11－12］。AKT是一个非常重要的信号中心，其能与100多种下游物质结合进而发生作用，例如:能够与糖原合成酶激酶-3(GSK-3)结合促进葡萄糖的摄取及合成糖原来储存能量［13］。该途径具有很重要的生理学功能，在癌症中该途径活性上调。因此，PDX1过表达可能调控胰腺癌细胞的生物学行为，但其机制有待进一步研究。·188·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Feb;52(2)
本文编号：2972087
【文章来源】：安徽医科大学学报. 2017,52(02)北大核心
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PDX1基因的扩增及重组质粒构建与鉴定A:PDX1基因PCＲ扩增图;B:PDX1重组质粒酶切鉴定图;C:PDX1重组质粒部分测序结果;M:DNAMarker;1:PDX1基因全长PCＲ产
图1PDX1基因的扩增及重组质粒构建与鉴定A:PDX1基因PCＲ扩增图;B:PDX1重组质粒酶切鉴定图;C:PDX1重组质粒部分测序结果;M:DNAMarker;1:PDX1基因全长PCＲ产物;2:双酶切PCMV6-Entry质粒;3:双酶切PDX1重组质粒图2Westernblot法分析PDX1、AKT及pAKT结果1:未转染组;2:转染空质粒组;3:过表达组;与未转染组比较:*P＜0.05;与转染空质粒组比较:#P＜0.053讨论在胰腺发育过程中，PDX1决定胚胎内胚层向胰腺祖细胞发展的机制，目前还不是很清楚。由于其在胰腺中的关键作用，许多研究试图利用PDX1将相应的组织和细胞重编程为胰腺细胞系。研究［9－10］表明在人皮肤角质化细胞和人肝脏细胞中过表达PDX1细胞转变成胰腺β细胞并分泌胰岛素。PDX1是胰腺发育中的关键性调节分子，控制胰腺细胞的生长和分化，而胰腺癌细胞的显著特点是低分化。因此，在胰腺癌细胞中PDX1表达缺失可能在发病中起一定作用，本研究显示过表达PDX1下调p-AKT水平。PI3K-AKT信号通路是细胞生存信号转导下游的共有途径，该途径激活进而导致细胞增殖，抑制细胞凋亡［11－12］。AKT是一个非常重要的信号中心，其能与100多种下游物质结合进而发生作用，例如:能够与糖原合成酶激酶-3(GSK-3)结合促进葡萄糖的摄取及合成糖原来储存能量［13］。该途径具有很重要的生理学功能，在癌症中该途径活性上调。因此，PDX1过表达可能调控胰腺癌细胞的生物学行为，但其机制有待进一步研究。·188·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Feb;52(2)
图1PDX1基因的扩增及重组质粒构建与鉴定A:PDX1基因PCＲ扩增图;B:PDX1重组质粒酶切鉴定图;C:PDX1重组质粒部分测序结果;M:DNAMarker;1:PDX1基因全长PCＲ产物;2:双酶切PCMV6-Entry质粒;3:双酶切PDX1重组质粒图2Westernblot法分析PDX1、AKT及pAKT结果1:未转染组;2:转染空质粒组;3:过表达组;与未转染组比较:*P＜0.05;与转染空质粒组比较:#P＜0.053讨论在胰腺发育过程中，PDX1决定胚胎内胚层向胰腺祖细胞发展的机制，目前还不是很清楚。由于其在胰腺中的关键作用，许多研究试图利用PDX1将相应的组织和细胞重编程为胰腺细胞系。研究［9－10］表明在人皮肤角质化细胞和人肝脏细胞中过表达PDX1细胞转变成胰腺β细胞并分泌胰岛素。PDX1是胰腺发育中的关键性调节分子，控制胰腺细胞的生长和分化，而胰腺癌细胞的显著特点是低分化。因此，在胰腺癌细胞中PDX1表达缺失可能在发病中起一定作用，本研究显示过表达PDX1下调p-AKT水平。PI3K-AKT信号通路是细胞生存信号转导下游的共有途径，该途径激活进而导致细胞增殖，抑制细胞凋亡［11－12］。AKT是一个非常重要的信号中心，其能与100多种下游物质结合进而发生作用，例如:能够与糖原合成酶激酶-3(GSK-3)结合促进葡萄糖的摄取及合成糖原来储存能量［13］。该途径具有很重要的生理学功能，在癌症中该途径活性上调。因此，PDX1过表达可能调控胰腺癌细胞的生物学行为，但其机制有待进一步研究。·188·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Feb;52(2)
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