人结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol的建立及其耐药机制研究

发布时间：2021-01-23 09:24

　　目的建立结肠癌细胞紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol,探讨结肠癌细胞对紫杉醇获得性耐药可能的分子机制并为耐药逆转研究提供良好的实验材料。方法以人结肠癌细胞株LoVo为亲本细胞,采用紫杉醇（Taxol）浓度梯度递增法诱导建立结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol。使用光学显微镜及电子显微镜观察细胞形态;cck-8法检测细胞对紫杉醇、阿霉素、5-氟脲嘧啶的药物敏感性;流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测多药耐药相关基因以及凋亡和细胞周期调控相关基因的转录和翻译情况。结果（1）建立的紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol对紫杉醇具有显著耐药性,对阿霉素（DOX）及5-氟脲嘧啶（5-FU）也产生强烈的耐药性。（2）可以观察到细胞形态与超微结构也发生了明显的变化,耐药细胞间的黏连明显少于亲本细胞,且细胞核质比略有变小,线粒体明显增多。（3）流式细胞仪测定的周期结果显示LoVo/Taxol细胞G2/M阻滞明显低于LoVo（p<0.05）,凋亡结果显示其凋亡率也显著低于亲本细胞株（p<0.05）。（4）通过... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

光学显微镜观察LoVo和LoVo-Taxol细胞形态（x200）

图 5 透射电子显微镜观察 LoVo、LoVo-Taxol 细胞超微结构注：图 5A 和 5B（x1000）; 图 5C 和 5D（x3000）透射电镜下观察发现亲本细胞 LoVo 胞浆少，细胞核大，胞浆内可见散在游离核糖，细胞表面布满不规则的微绒毛，细胞之间可以看到互相黏连（图 5A，5C）；而耐细胞 LoVo/Taxol 则胞核变小，核浆比例减小，胞浆内空泡结构明显增多，游离核糖体集且数量增多，线粒体数量增多，细胞表面可见大量的小球状隆起（图 5B，5D）。细胞形态学结果显示 LoVo 细胞经过 Taxol 长期作用后已发生稳定的变化，经过一时间的脱药培养后，细胞形态并没有恢复亲本的趋势，是可以稳定遗传的。

图 6 LoVo 和 LoVo-Taxol 细胞生长曲线图注：*P<0.05， **P<0.01 和 ***P<0.001经过六天连续测定亲本细胞和耐药细胞生长曲线发现，它们的生长曲线形态 LoVo细胞相比，LoVo-Taxol 0.7 和 LoVo-Taxol 1.5 在前三天细胞增殖速度无明显在第 4 和第 5 天，增殖速度明显加快（P＜0.05）,第 6 天又趋于一致（图 6）。oVo-Taxol 0.7 和 LoVo-Taxol 1.5 细胞的倍增时间分别为 25.92h、25.32h 和 22.22细胞倍增时间的减少表明细胞耐药后细胞的增殖未收到抑制，相反有所增强。

【参考文献】：
期刊论文
[1]生物合成紫杉醇的研究进展[J]. 彭涛,林军,胡海峰,朱宝泉.  世界临床药物. 2015(03)



本文编号：2994973