食管鳞癌中SGK3水平对PI3K抑制剂抗肿瘤作用的影响及分子机制

发布时间：2021-01-26 17:49

　　目的探讨下调SGK3表达后食管鳞癌细胞对PI3K抑制剂GDC-0941敏感性的变化及分子机制。方法一、GDC-0941对食管鳞癌细胞增殖及PI3K、SGK3蛋白表达的影响CCK-8法检测PI3K抑制剂GDC-0941对食管鳞癌细胞增殖的影响,Western blot检测GDC-0941长时间处理食管鳞癌细胞对PI3K、SGK3相关蛋白表达的影响。二、SGK3表达水平对GDC-0941抗食管鳞癌作用的影响1.SGK3-shRNA慢病毒载体感染EC9706和ECa109细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达株,并挑取单克隆,Western blot检测感染效果,将下调效率最高的细胞用于后续实验。2.CCK-8、克隆形成、划痕实验、细胞周期实验检测下调SGK3后食管鳞癌细胞对GDC-0941敏感性的变化。三、SGK3表达水平对GDC-0941抗食管鳞癌作用影响的分子机制1.GDC-0941处理筛选的食管鳞癌细胞72 h,提取细胞总蛋白,Western blot检测GSK3β和β-catenin相关蛋白的表达。2.GDC-0941处理筛选的及未转染的食管鳞癌细胞0h、3 h、24 h、72 h和120 h... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

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图１?ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴ０Ｒ和ＥＲＫ信号通路??９??

?第一章ＧＤＣ－０９４１对食管鱗癌细胞增殖及Ｈ３Ｋ、ＳＧＫ３蛋白表达的影响???３结果??３．１?ＧＤＣ－０９４１对食管鱗癌细胞增殖的影响??不同浓度ＧＤＣ－０９４１处理ＥＣ９７０６和ＥＣａｌ０９细胞２４?ｈ和４８?ｈ，?ＣＣＫ－８法检??测ＧＤＣ－０９４１对细胞增殖的影响。如图１．２所示，随ＧＤＣ－０９４１浓度增力Ｐ，两株??细胞的细胞活力均明显下降，证明ＧＤＣ－０９４１对ＥＣ９７０６和ＥＣａｌ０９细胞增殖具??有抑制作用，ＧＤＣ－０９４１作用ＥＣ９７０６细胞２４ｈ的ＩＣ５〇值为１８．６７４±１．２７ｐＭ，作??用?４８ｈ?的?ＩＣ５Ｇ?值为?１１．０５±１．０４ｎＭ；作用?ＥＣａｌ０９?细胞?２４ｈ?的?ＩＣ５〇?值为?１７．９６±１．２５??ＨＭ，作用?４８ｈ?的?ＩＣ５０?值为?８．０７±０＿９１?卜ｉＭ。??Ａ?Ｂ??１２０］?ＥＣ９７０６?１２０－，?ＥＣａｌ０９?女?４８?ｈ??１００－?＋?４８ｈ?１００－?－ａ－??｜?８〇＿?＊?心?｜?８。－??！：?！：??２０－?、?２０－??Ｏ－＾?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?１—?〇Ｊ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??０?１?５?１０?２０?５０?０?１?５?１０?２０?５０??Ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧＤＣ－０９４１?（｜ｉＭ）?Ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧＤＣ－０９４１?（ｐＭ）??图１．２?ＧＤＣ－０９４１对食管鳞癌ＥＣ９７０６?（Ａ）和ＥＣａｌ０９?（Ｂ）细胞增殖的影响??３．２?ＧＤＣ－０９４１对食管鳞癌细胞ＰＩ３Ｋ和ＳＧＫ３相关蛋白表达的影响??ＧＤＣ－０９４

?｜?，?，?［ｉ?ＧＤＣ－０９４１?２４?ｈ??ｇ?ｈ?□?ＧＤＣ－０９４１?７２?ｈ?ｉ?＿?Ｈ?圈?ＧＤＣ－０９４１?７２?ｈ??ｇ?国?ＧＤＣ－０９４１?１２０?ｈ?…?？吾?Ｅ３?ＧＤＣ－０９４１?１２０?ｈ??Ｏ?“?＿Ｔ?Ｐ??ｉｊｌｌｌｌｉ?ｎｎｉ，ｌ?ｎｊｌｌｌＪｌｌｌｌ，ｌｌ?ｎＪｌｉ?＿．ｉｉｉ??ＰＩ３Ｋ?ＳＧＫ３?ｐ－ＳＧＫ３（Ｔｈｒ３２０）?ＰＩ３Ｋ?ＳＧＫ３?ｐ－ＳＧＫ３（Ｔｈｒ３２０）??ＥＣ９７０６?ＥＣａｌ０９??图１．３?ＧＤＣ－０９４１处理食管鳞癌细胞ＥＣ９７０６和ＥＣａｌ０９不同时间，Ｐ１３Ｋ、ＳＧＫ３和??Ｐ－ＳＧＫ３?蛋白水平的变化（与?Ｃｏｎｔｒｏｌ?组相比，＊Ｐ＜０．０５，?＃Ｐ＜０．０１，＇＾ｉ＾Ｏ．ＯＯｌ）??４讨论??ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ信号通路己被证明在食管鳞癌中是高度激活的，针对该通路??的抑制剂一直广受研宄者的关注［１９］。ＰＩ３Ｋ作为该通路中关键的效应因子，在肿??瘤的发生发展中也起着很关键的促进作用［２９，３Ｇ］。ＧＤＣ－０９４１是一种全ＰＩ３Ｋ抑制剂，??己被证明在乳腺癌中有很好的的抑制增殖效果，且在晚期非鳞状非小细胞肺癌??患者中，体现良好的耐受性和安全性［６７］。然而，目前通路抑制剂的耐药性一直是??一个亟待解决的问题，有研宂证明ＰＩ３Ｋ抑制剂的耐药性与其他通路或致癌因子??的代偿性激活有关，如应用一类ＰＩ３Ｋ抑制剂会引起ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ、ＡＸＬ、??２２??


本文编号：3001556