长链非编码RNA-KAT7在结直肠癌增殖转移中的作用研究

发布时间：2021-01-30 23:18

　　目的:长链非编码RNA（lnc RNA）在结直肠癌（CRC）中的作用尚未完全阐明。本研究旨在初步鉴定lnc RNA-KAT7在CRC细胞增殖、迁移中的作用及潜在机制。方法:收集2014-2017年期间郴州市第一人民医院140例诊断为结直肠癌的癌组织及匹配的正常或良性组织样本。采用实时荧光定量PCR技术检测lnc RNA-KAT7在CRC组织、细胞系中的表达,通过卡方检验分析其表达与CRC患者年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移等的相关性。利用pc DNA3.1空载体构建了lnc RNA-KAT7的表达载体pc DNA-lnc RNA-KAT7。用Lip2000脂质体将lnc RNA-KAT7重组质粒瞬时转染相对低表达lnc RNA-KAT7的CRC细胞株,使用新霉素筛选,建立稳定表达lnc RNA-KAT7的单克隆细胞株。然后进行细胞CCK-8实验、克隆形成实验、EDU增殖实验、划痕实验、Transwell实验、裸鼠皮下注射成瘤实验以及蛋白免疫印迹法等体内外实验以评估其在CRC中的生物学作用和潜在的分子机制。结果:lnc RNA-KAT7在CRC组织中的表达水平明显低于癌旁正常或良性肠... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

空载体pcDNA-3.1+

第3章 结 果3.1 lncRNA-KAT7 基因的基本信息如上所述，我们先前使用“Agilent 全人类基因组寡核苷酸微阵列（4×44K）”按照标准方案进行 lncRNA 表达谱芯片分析(结果未发表)，在差异表达的 lncRNA转录物中筛选出一种长链非编码 RNA KAT7。LncRNA-KAT7 位于人类 17 号染色体 hg19 区域正链上，转录本全长 575 碱基。生物信息软件预测其没有开放阅读框（Open Reading Frame, ORF）,PhyloSCF 得分为-342，提示 lncRNA-KAT7无蛋白编码能力。GC 含量 58%，无 5'端帽子结构和 3'端多聚腺苷酸尾巴（如图3.1）。

的预实验显示 lncRNA-KAT7 在 CRC 肿瘤组织中的表达下调。为了验证果，我们使用实时荧光定量 PCR 实验检测了 140 对配对的 CRC 癌组织与组织中 lncRNA-KAT7 的表达水平，GAPDH 作为内部参照。实验结果显ncRNA-KAT7 的表达水平在 71.4％（100/140）的 CRC 组织中与匹配的正织相比明显下调（P <0.05）（如图 3.2 A）。lncRNA-KAT7 在 CRC 细胞表达也低于正常肠上皮细胞 CCD-18co（如图 3.2 B），与组织学结果相符。们评估了 lncRNA-KAT7 表达水平是否与 CRC 患者的临床病理参数相关。 140 例 CRC 患者分为 lncRNA-KAT7 高表达组（n = 70）和低表达组（n =如表 1 所示，CRC 中 lncRNA-KAT7 的表达水平与肿瘤分化（p = 0.034），转移（p = 0.042），肿瘤大小（p = 0.011），肿瘤部位（p = 0.027）密切以上数据表明 lncRNA-KAT7 在 CRC 的发生发展中起重要作用。A


本文编号：3009761