TRIM25对内质网相关蛋白降解的调控作用及其机制研究

发布时间：2021-01-31 23:00

　　当前,中国每年有3%的人死于恶性肿瘤,恶性肿瘤已然成为威胁人类健康的关键因素,因此进一步探究恶性肿瘤的发病机理对开发有效的临床治疗方案十分迫切。内质网应激是指细胞微环境受缺氧或营养缺失等某些因素干扰时,内质网生理功能发生紊乱从而导致蛋白错误折叠的现象。肿瘤细胞长期暴露于慢性缺血、缺氧等应激微环境中,从而常常处于内质网应激情况下。尽管如此,它们却仍能维持正常的生理功能和存活。这是由于大部分肿瘤细胞已进化出更强的应对内质网应激的能力,创造有利于自身存活的条件。通常情况下,内质网应激会启动ERAD（endoplasmic reticulum associated protein degradation,内质网相关蛋白降解）,该反应可以帮助肿瘤细胞清除内质网错误折叠蛋白以维持自身存活,因此ERAD在肿瘤的发生发展中有着重要作用。但是目前关于ERAD的相关研究甚少,本研究旨在揭示调控ERAD的分子机制,进而为肿瘤的临床治疗提供新理论依据和新的靶点。本研究前期利用内质网应激阳性诱导药物TM、TG处理细胞,发现TRIM家族蛋白成员TRIM25（tripartite motif-containing ... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院)广东省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 质粒及细胞系
        2.1.2 主要试剂及抗体
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 克隆TRIM25 表达质粒
        2.2.3 构建TRIM25 稳定敲低细胞系
        2.2.4 Western blot检测蛋白质水平
        2.2.5 RT-qPCR检测mRNA水平
        2.2.6 流式细胞术检测细胞ROS水平和凋亡率
        2.2.7 免疫共沉淀寻找TRIM25 相互作用蛋白
        2.2.8 细胞核质蛋白分离
        2.2.9 动物实验
        2.2.10 统计学分析
第3章 结果
    3.1 TRIM25 是新型内质网应激诱导蛋白并负反馈调节内质网应激
    3.2 TRIM25 调控ERAD信号通路
    3.3 TRIM25 调控肿瘤细胞ROS水平和凋亡
    3.4 TRIM25与Keap1 存在相互作用
    3.5 TRIM25 通过E3 泛素连接酶活性降低Keap1 的蛋白稳定性
    3.6 TRIM25 调控肿瘤细胞ROS水平和存活依赖于Nrf2
    3.7 TRIM25 敲低抑制肿瘤的生长
第4章 总结与讨论
参考文献
附录 （中英文缩略词对照表）
致谢
作者简历及攻读学位期间公开发表的论文



本文编号：3011731