NLRC5靶向Wnt/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的功能及机制研究

发布时间：2021-02-04 16:14

　　肝癌是全球第五大致死性癌症疾病,其发病率和死亡率已有逐渐上升趋势。近年来的研究发现肝脏的慢性炎症与肝癌的发生、进展及预后有密切联系。病毒、细菌等致病性病原微生物一旦入侵机体,将迅速启动机体天然免疫应答并触发炎症性反应。天然免疫是抗病原体感染的第一道防御屏障,引发炎症和对感染的抵抗,其反应反复持续会造成慢性炎症甚至可能引发癌症。研究发现NLRs（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors）家族成员,如NOD1、NOD2、NLRP1、NLRP3、NLRP7及NLRP12等,通过调控多种信号通路参与肿瘤尤其是胃肠道肿瘤的发生发展。NLRC5（NLR family,CARD domain containing 5）是最新发现的NOD样受体（NOD like receptors,NLRs）家族成员之一,参与机体天然免疫应答和抗病原体感染,可能在短期内诱发急性炎症反应或抗炎反应,而长期作用引发免疫调控功能失衡,可能与癌症的发生发展有关。NLRC5可能在肝癌的发生发展过程中起着重要作用。研究表明Wnt/β-catenin信号通路激... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

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1 前言
2 实验材料
    2.1 仪器与设备
    2.2 药品与试剂
    2.3 肝脏组织、细胞株、菌株及质粒
3 实验方法
    3.1 免疫组织化学SP染色
    3.2 人源NLRC5重组质粒的构建
TM 2000试剂瞬时转染siRNA进入细胞">    3.3 Lipofectamin^TM 2000试剂瞬时转染siRNA进入细胞
TM 2000试剂瞬时转染NLRC5重组质粒进入细胞">    3.4 Lipofectamin^TM 2000试剂瞬时转染NLRC5重组质粒进入细胞
    3.5 q RT-PCR法检测m RNA表达
    3.6 Western blot法检测蛋白表达
    3.7 MTT细胞增殖实验
    3.8 流式细胞仪检测检测细胞周期
    3.9 肿瘤细胞划痕实验
    3.10 Transwell肿瘤细胞迁移与侵袭实验
    3.11 数据处理
4. 实验结果
    4.1 NLRC5在肝脏组织和细胞中的蛋白变化
        4.1.1 人肝组织中NLRC5蛋白表达
        4.1.2 正常肝细胞和肝癌细胞中的NLRC5蛋白表达
    4.2 NLRC5对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响
        4.2.1 过表达NLRC5对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响
        4.2.2 沉默NLRC5对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响
    4.3 NLRC5对Wnt/β-catenin信号通路的影响
        4.3.1 正常肝细胞和肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路表达情况
        4.3.2 过表达NLRC5对 β-catenin mRNA和蛋白表达的影响
        4.3.3 沉默NLRC5对 β-catenin m RNA和蛋白表达的影响
        4.3.4 过表达NLRC5对Cyclin D1、C-myc和MMP-7 蛋白表达的影响
        4.3.5 沉默NLRC5对Cyclin D1、C-myc和MMP-7 蛋白表达的影响
        4.3.6 β-catenin 抑制剂 iCRT3 对 BEL-7402 肝癌细胞增殖的影响
        4.3.7 β-catenin 抑制剂 iCRT3 对肝癌细胞 BEL-7402 迁移能力的影响
        4.3.8 iCRT3对肝癌细胞BEL-7402中 β-catenin、Cyclin D1、C-myc和MMP-7 蛋白表达的影响
5.讨论
6.结论
7.参考文献
附录
致谢
Functions of NLRC5 in immunity and inflammation
    REFERENCES



本文编号：3018587