联合应用靶向CD138和CD19抗原的CAR-T细胞提高对多发性骨髓瘤的毒性

发布时间：2021-02-11 22:50

　　多发性骨髓瘤（MM）是以克隆性浆细胞异常增殖为特征的恶性肿瘤,也是全球仅次于非霍奇金氏淋巴瘤的第二常见的血液肿瘤。近年来针对MM的临床治疗取得了显著成效,尤其是几类新型药物例如硼替佐米、来那度胺、卡非佐米等的临床应用,极大改善了MM患者的生存率。但是,由于耐药性的发生,大多数MM患者终将因为复发而死亡。我们利用近年来在B细胞急性淋巴细胞白血病临床试验中获得成功的嵌合抗原受体基因修饰的T细胞（CAR-T细胞）技术,针对MM细胞高表达CD138,以及少部分MM细胞呈现CD138-/CD19+的特点,而且基于CD19-CAR-T细胞已被初步发现可有效杀伤MM细胞的临床试验报道,分别构建了靶向CD138和CD19的CAR-NK-92MI细胞和CAR-T细胞,以多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226和U266为模型,在体外验证这几种CAR细胞的细胞毒性,结果显示无论是CAR-NK-92MI细胞还是CAR-T细胞,其细胞毒性都远远要高于未做修饰的NK-92MI细胞和T细胞。另外通过小鼠实验,证明了联合应用CAR-CD138-T细胞和CAR-CD19-T细胞对MM小鼠模型具有更加显著的毒性。 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

酶切图谱胶回收后进行酶连，做转化，挑阳性菌落进行PCR菌检，菌检图谱如下图

挑阳性菌落进行 PCR 菌检，菌检图谱如下图1B 所示，DNA marker 为 2000 bp，从结果来看 CD138-CAR 1-5 条带和 hCD19-CAR1、2、5 条带基本相符，满足后续测序验证的条件。

图 2 K562 表面抗原的检测A. K562-CD138（上图）和 K562-CD19（下图）细胞表面抗原检测；B. K562 细胞表面 CD138（上层）和 CD19（下层）抗原检测。1.3 肿瘤细胞抗原检测为了验证 CAR-CD138 细胞的体外杀伤效果，我们选择 CD138 阳性的多发性骨髓瘤细胞系 8226 和 U266 细胞作为靶细胞，由于骨髓瘤细胞表面 CD19 抗原表达水平级低，难以使用常规方法检测，所以我们暂且选择两株 CD19 阳性的套细胞淋巴瘤细胞系 MAVER-1 和 JeKo-1 作为靶细胞，来验证 hCD19-CAR 细胞的体外毒性。图 3 是几种靶细胞表型检测情况，8226 和 U266 细胞表面 CD138 抗原的表达率分别为 98%和 99%（图 3A），MAVER-1 和 JeKo-1 表面 CD19 抗原的表达率分别为 93%和 75%（图 2B）。


本文编号：3029839