幽门螺杆菌感染诱导KLF4-CXCL8反馈调控在胃癌进展中的作用
发布时间：2021-02-14 01:56
【研究背景】截至2015年,在中国范围内胃癌的发生率和死亡率都位居前五,表明胃癌依然是一个严峻的影响人民生命健康的因素。目前胃癌的免疫治疗得到了快速发展,并且也取得了一定的临床治疗效果,但是依然没有达到人们所预期的效果,这可能还有其他的因素干扰了免疫治疗。幽门螺杆菌感染是胃癌发生发展的一个关键因素,其中主要发挥致癌作用的是细胞毒素相关抗原（CagA）蛋白,是HP通过特异性IV型分泌系统分泌至细胞中。研究表明CagA可以引起KLF4在胃癌中的低表达,并且其机制研究表明CagA可以通过KLF4启动子区的甲基化,以及MIR155途径导致KLF4的表达沉寂或失活。KLF4是一个含有锌指结构的转录因子,研究已经表明KLF4在胃癌中起到抑癌基因的作用,并且已被证实,研究其失活机制对于胃癌治疗至关重要。我们课题组前期主要研究了CagA导致KLF4失活的机制,那么抑癌蛋白KLF4的低表达或丢失与促进胃癌发展之间的具体机制是什么呢?CXCL8是趋化因子家族的一种细胞因子,与特异性受体结合发挥作用,参与多种炎症反应,主要由单核-巨噬细胞分泌。研究表明HP胃黏膜上皮细胞24h后全基因组中CXCL8是唯一一个...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
胃癌在组织中KLF4低表达，CXCL8高表达
安徽医科大学硕士论文36图2.H.pylori感染或CagA基因转染后诱导CXCL8表达。（A,B,C）GES-1,AGS,MGC-803与幽门螺杆菌共培养增强了CXCL8的表达。（D,E,F）GES-1,AGS,MGC-803转染CagA（1.5ug）同样增强了CXCL8的表达。Figure2.H.pyloriinfectionorCagAtransfectioninducesCXCL8overexpression.(A)TheGES-1normalgastricmucosalepithelialcelllinewascoculturedwithH.pyloriatdifferentconcentrations.After48h,CXCL8RNAlevelswereincreased(A,leftpanel),whileCXCL8proteinlevelswerealsoupregulated(A,rightpanel).(B,C)AGS/MGC803gastriccancercellswerecoculturedwithH.pylori,andCXCL8RNAandproteinlevelswereupregulated.(D,E,F)CagA(1.5ug)wastransfectedintotheGES-1/AGS/MGC803celllines,andafter48h,CXCL8proteinandRNAlevelsweresignificantlyupregulated.Theexperimentswereperformedindependentlythreetimes.3.3KLF4在体外抑制CXCL8表达并抑制CXCL8诱导的胃癌细胞恶性行为变化。在我们之前的研究中，我们知道幽门螺杆菌降低了KLF4的表达，这与幽门螺杆菌在胃癌细胞中促进CXCL8的高表达相反。针对这个问题，我们研究了体外胃癌细胞中CXCL8和KLF4之间的相互作用。将KLF4过表达质粒转染入两个胃癌细胞(AGS,MGC-803)中，处理48h后收集细胞和细胞上清液，通过Qrt-pcr和
安徽医科大学硕士论文39在功能性。当HA-KLF4表达载体转染到AGS细胞中时，染色质免疫共沉淀（ChIP）显示与CXCL8启动子区域结合的KLF4蛋白显著增加（图4D），表明KLF4蛋白能够与CXCL8启动子区结合。因此KLF4能够抑制CXCL8的表达，在胃癌中CXCL8是KLF4的重要下游靶基因。图4.KLF4负向调节CXCL8。（A）构建的CXCL8启动子报告基因及其三个突变体报告基因载体。（B,C）将KLF4表达载体与CXCL8启动子报告基因及其三个突变报告基因载体共转染至GES-1和胃癌细胞AGS中，利用双荧光素酶报告基因检测CXCL8启动子报告基因活性。（D）将HA-KLF4表达载体转染至AGS细胞中，利用染色质免疫沉淀技术检测KLF4与CXCL8启动子区是否结合。Figure4.NegativeregulationofCXCL8expressionbyKLF4(A)Schematicofthefull-lengthCXCL8promoterreporteranditsmutantconstructs.TwopotentialKLF4-bindingsitesareindicated.Vectorscontainingwild-typeandthreesite-specificmutatedCXCL8promotersequencesandaluciferasereportergenewereconstructedandnamedWT,Site1,Site2,andDoublesite.(B)TheCXCL8promoteractivityinGES-1cellsat48haftertransfectionwiththepcDNA3.1-KLF4vectorisshown.(C)Similarly,theCXCL8promoterwascotransfectedwiththepcDNA3.1-KLF4vectorintoAGScells.(D)ChIPanalysisofKLF4bindingtotheCXCL8promoterregionwithapotentialKLF4-bindingsiteinAGSgastriccancercell.Theexperimentswereperformedindependentlythreetimes.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular mechanisms of chemoresistance in gastric cancer[J]. Wen-Jia Shi,Jin-Bo Gao. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(09)
[2]Inflammatory microenvironment contributes to epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer[J]. Hui-Ying Ma,Xin-Zhou Liu,Chun-Min Liang. World Journal of Gastroenterology. 2016(29)
[3]Correlation of Helicobacter pylori and interleukin-8 mRNA expression in high risk gastric cancer population prediction[J]. Wilaiwan Chongruksut,Sirikan Limpakan（Yamada）,Bandhuphat Chakrabandhu,Chidchanok Ruengorn,Sirisak Nanta. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(02)
本文编号：3032934
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
胃癌在组织中KLF4低表达，CXCL8高表达
安徽医科大学硕士论文36图2.H.pylori感染或CagA基因转染后诱导CXCL8表达。（A,B,C）GES-1,AGS,MGC-803与幽门螺杆菌共培养增强了CXCL8的表达。（D,E,F）GES-1,AGS,MGC-803转染CagA（1.5ug）同样增强了CXCL8的表达。Figure2.H.pyloriinfectionorCagAtransfectioninducesCXCL8overexpression.(A)TheGES-1normalgastricmucosalepithelialcelllinewascoculturedwithH.pyloriatdifferentconcentrations.After48h,CXCL8RNAlevelswereincreased(A,leftpanel),whileCXCL8proteinlevelswerealsoupregulated(A,rightpanel).(B,C)AGS/MGC803gastriccancercellswerecoculturedwithH.pylori,andCXCL8RNAandproteinlevelswereupregulated.(D,E,F)CagA(1.5ug)wastransfectedintotheGES-1/AGS/MGC803celllines,andafter48h,CXCL8proteinandRNAlevelsweresignificantlyupregulated.Theexperimentswereperformedindependentlythreetimes.3.3KLF4在体外抑制CXCL8表达并抑制CXCL8诱导的胃癌细胞恶性行为变化。在我们之前的研究中，我们知道幽门螺杆菌降低了KLF4的表达，这与幽门螺杆菌在胃癌细胞中促进CXCL8的高表达相反。针对这个问题，我们研究了体外胃癌细胞中CXCL8和KLF4之间的相互作用。将KLF4过表达质粒转染入两个胃癌细胞(AGS,MGC-803)中，处理48h后收集细胞和细胞上清液，通过Qrt-pcr和
安徽医科大学硕士论文39在功能性。当HA-KLF4表达载体转染到AGS细胞中时，染色质免疫共沉淀（ChIP）显示与CXCL8启动子区域结合的KLF4蛋白显著增加（图4D），表明KLF4蛋白能够与CXCL8启动子区结合。因此KLF4能够抑制CXCL8的表达，在胃癌中CXCL8是KLF4的重要下游靶基因。图4.KLF4负向调节CXCL8。（A）构建的CXCL8启动子报告基因及其三个突变体报告基因载体。（B,C）将KLF4表达载体与CXCL8启动子报告基因及其三个突变报告基因载体共转染至GES-1和胃癌细胞AGS中，利用双荧光素酶报告基因检测CXCL8启动子报告基因活性。（D）将HA-KLF4表达载体转染至AGS细胞中，利用染色质免疫沉淀技术检测KLF4与CXCL8启动子区是否结合。Figure4.NegativeregulationofCXCL8expressionbyKLF4(A)Schematicofthefull-lengthCXCL8promoterreporteranditsmutantconstructs.TwopotentialKLF4-bindingsitesareindicated.Vectorscontainingwild-typeandthreesite-specificmutatedCXCL8promotersequencesandaluciferasereportergenewereconstructedandnamedWT,Site1,Site2,andDoublesite.(B)TheCXCL8promoteractivityinGES-1cellsat48haftertransfectionwiththepcDNA3.1-KLF4vectorisshown.(C)Similarly,theCXCL8promoterwascotransfectedwiththepcDNA3.1-KLF4vectorintoAGScells.(D)ChIPanalysisofKLF4bindingtotheCXCL8promoterregionwithapotentialKLF4-bindingsiteinAGSgastriccancercell.Theexperimentswereperformedindependentlythreetimes.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular mechanisms of chemoresistance in gastric cancer[J]. Wen-Jia Shi,Jin-Bo Gao. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(09)
[2]Inflammatory microenvironment contributes to epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer[J]. Hui-Ying Ma,Xin-Zhou Liu,Chun-Min Liang. World Journal of Gastroenterology. 2016(29)
[3]Correlation of Helicobacter pylori and interleukin-8 mRNA expression in high risk gastric cancer population prediction[J]. Wilaiwan Chongruksut,Sirikan Limpakan（Yamada）,Bandhuphat Chakrabandhu,Chidchanok Ruengorn,Sirisak Nanta. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(02)
本文编号：3032934
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