不同成瘤性MDCK细胞中SQSTM1的差异表达验证

发布时间：2021-02-17 23:08

　　SQSTM1/p62为一种泛素结合蛋白核自噬受体（sequestosome 1,SQSTM1）,有调节NRF2、mTOR和NF-κB的作用,这些因子则在肿瘤信号通路中较为重要,SQSTM1的异常积聚提示自噬缺陷,已知乳腺癌、肺癌等疾病也发现了这种异常聚集小体的存在。本研究为探讨SQSTM1不同成瘤性MDCK细胞中的差异表达。培养不同成瘤性的MDCK细胞,通过RT-qPCR来检测SQSTM1在不同成瘤性MDCK细胞中的表达。结果表明:SQSTM1在不同成瘤性MDCK细胞中存在差异,在高成瘤性细胞株MEDK-A和MDCK-B中表达高,在低成瘤性细胞株MDCK-C中表达量低,说明该蛋白对MDCK细胞的成瘤性起到一定的调控作用,为进一步研究SQSTM1在不同成瘤性MDCK细胞中的作用机制奠定理论基础。 

【文章来源】：甘肃畜牧兽医. 2020,50(08)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

不同成瘤性细胞中SQSTM1的表达结果

根据细胞生长条件需要,对不同细胞采用不同的培养条件进行培养。将贴壁细胞培养48 h后置于显微镜下用4倍目镜观察细胞的生长状况,如图1所示,发现所培养细胞生长状态良好,细胞轮廓清晰,悬浮细胞的活力高、结团少、均一性好。其中MRC-5(图A)成纤维状生长;贴壁型MDCK-A(图B)成上皮样生长;悬浮型MDCK-B(图C)呈圆形悬浮生长于无血清培养基中,MDCK-C(图D)成上皮样生长;可用于后续实验。2.2 TRIzol Reagent提取不同成瘤性细胞总RNA的纯度分析

RT-PCR检测结果显示:所设计的引物特异性高,定量结果重复性好(见图2),以MRC-5为对照组,发现SQSTM1在高成瘤性MDCK-A和MDCK-B中高表达,而在低成瘤性细胞株MDCK-C中较高成瘤性组大大降低(见图3)。说明SQSTM1在细胞内的表达量可能与细胞成瘤性成正相关,可为进一步研究SQSTM1在MDCK细胞成瘤性的作用机制研究提供理论参考。图3 不同成瘤性细胞中SQSTM1的表达结果


本文编号：3038680