CRISPR/Cas9介导的SMYD3基因敲除对人肺癌细胞的影响研究
发布时间：2021-02-23 16:41
CRISPR/Cas9基因编辑系统是基于细菌和古细菌抵御外源核酸入侵的免疫机制为基础开发出来的一种新型的基因编辑技术,通过RNA介导,特异性地切割外源遗传物质来对抗入侵的病毒和质粒。其具有靶向性强、剪切效率高的特点,在高效、多位点的基因组定点修饰方面更加具有优势。目前,CRISPR/Cas9技术在基因的功能研究、基因治疗、转基因动物等研究领域具有广阔前景。SETand MYND domain-containing protein 3 （SMYD3）是一种组蛋白H3-K4甲基化酶,存在于多种恶性肿瘤如肝细胞癌、结肠癌、乳腺癌及胆管癌中,在其发生发展过程中起重要作用。SMYD3可通过与其下游基因的启动子区特异位点的结合,改变染色体组蛋白甲基化的修饰状态来调控基因表达,从而对细胞的增殖、迁移、凋亡等产生影响,但其调节机制还有待明确。本研究检测了SMYD3 mRNA在人肺癌细胞系中的表达,并利用CRISPR/Cas9技术敲除SMYD3基因后研究其对肺癌细胞恶性表型的影响。利用实时定量PCR检测了在人肺癌细胞系A549、H460中SMYD3 mRNA的表达水平,结果表明,H460肺癌细胞系SMY...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 综述部分
第一章 CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术
引言
1.1 CRISPR/Cas的定义与作用机理
1.2 CRISPR/Cas9技术的应用
1.3 CRISPR/Cas9技术脱靶作用的研究
1.4 CRISPR/Cas9技术与其他基因编辑技术的比较
1.5 结语与展望
参考文献
第二章 SMYD3在肿瘤中的研究进展
引言
2.1 SMYD3的结构与功能
2.2 SMYD3与下游基因的关系
2.3 SMYD3与肿瘤之间的关系
2.4 展望
参考文献
第二部分 实验部分
第一章 CRISPR/Cas载体的构建及检测
引言
材料与方法
1 实验材料
2 实验方法
实验结果
1 测序分析
2 载体构建
3 细胞转染
4 SMYD3的PCR引物的验证
5 SMYD3基因敲除的鉴定
6 测序鉴定
讨论
第二章 CRISPR/Cas9载体敲除SMYD3基因后对人肺癌细胞A549和H460的影响
引言
材料与方法
结果
1 基因敲除前后不同细胞系中SMYD3表达水平比较
2 敲除SMYD3基因后对细胞特性的影响
讨论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9基因组编辑技术在癌症研究中的应用[J]. 王大勇,马宁,惠洋,高旭. 遗传. 2016(01)
[2]基因组编辑技术研究新进展[J]. 毛超,陶永光. 生命的化学. 2015(01)
[3]中国癌症流行病学与防治研究现状[J]. 曾红梅,陈万青. 化学进展. 2013(09)
[4]SMYD3调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖机制的研究[J]. 任天年,何赟绵,汤锋,张婷,沈晶,奚涛. 药学进展. 2012(02)
[5]Efficient production of omega-3 fatty acid desaturase （sFat-1）-transgenic pigs by somatic cell nuclear transfer[J]. PAN DengKe1, ZHANG Li1, ZHOU YanRong2, FENG Chong1, LONG Chuan1, LIU Xiao1, WAN Rong3, ZHANG Jian3, LIN AiXing3, DONG EnQiu4, WANG ShuChen4, XU HouGang4 & CHEN HongXing2 1 Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China; 2 Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100071, China; 3 China Agricultural University, Beijing 100193, China; 4 Yutian Breeding Swine Farms, Yutian 064104, China. Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[6]组蛋白甲基转移酶SMYD3在不同HBV表达水平肝癌细胞中的差异表达[J]. 何军,马兆龙,陈立波,王国斌. 世界华人消化杂志. 2008(18)
[7]Silencing SMYD3 in hepatoma demethylates RIZI promoter induces apoptosis and inhibits cell proliferation and migration[J]. Li-Bo Chen, Jun-Yao Xu, Zhen Yang, Guo-Bin Wang Li-Bo Chen, Guo-Bin Wang, Hepatobiliary center, Union Hospital of Huazhong University of Science & Technology, Wuhan 430022, Hubei province, China Jun-Yao Xu, Department of General Surgery, The Second Affiliated Hospital of Sun Yat-seu University, Guangzhou 510120, Guangdong province, China Zhen Yang, Department of integrated surgery, Tongji Hospital of Huazhong University of Science & Technology, Wuhan 430030, Hubei province, China. World Journal of Gastroenterology. 2007(43)
[8]RNA干扰SMYD3基因表达对诱导肝癌细胞凋亡的影响[J]. 徐鋆耀,陈立波,徐鋆阳,杨镇,魏海燕,许荣华. 癌症. 2006(05)
博士论文
[1]重编程的CRISPR-Cas9对HPV6/11 E7基因转化细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究[D]. 刘宇辰.安徽医科大学 2015
[2]利用CRISPR/Cas9进行基因编辑[D]. 沈彬.南京大学 2014
[3]ZFNs介导的牛MSTN位点的基因打靶研究[D]. 赵宇航.内蒙古大学 2014
硕士论文
[1]利用锌指核酶技术制备MSTN基因敲除的牛胎儿成纤维细胞[D]. 云亭.内蒙古大学 2013
本文编号：3047901
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一部分 综述部分
第一章 CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术
引言
1.1 CRISPR/Cas的定义与作用机理
1.2 CRISPR/Cas9技术的应用
1.3 CRISPR/Cas9技术脱靶作用的研究
1.4 CRISPR/Cas9技术与其他基因编辑技术的比较
1.5 结语与展望
参考文献
第二章 SMYD3在肿瘤中的研究进展
引言
2.1 SMYD3的结构与功能
2.2 SMYD3与下游基因的关系
2.3 SMYD3与肿瘤之间的关系
2.4 展望
参考文献
第二部分 实验部分
第一章 CRISPR/Cas载体的构建及检测
引言
材料与方法
1 实验材料
2 实验方法
实验结果
1 测序分析
2 载体构建
3 细胞转染
4 SMYD3的PCR引物的验证
5 SMYD3基因敲除的鉴定
6 测序鉴定
讨论
第二章 CRISPR/Cas9载体敲除SMYD3基因后对人肺癌细胞A549和H460的影响
引言
材料与方法
结果
1 基因敲除前后不同细胞系中SMYD3表达水平比较
2 敲除SMYD3基因后对细胞特性的影响
讨论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9基因组编辑技术在癌症研究中的应用[J]. 王大勇,马宁,惠洋,高旭. 遗传. 2016(01)
[2]基因组编辑技术研究新进展[J]. 毛超,陶永光. 生命的化学. 2015(01)
[3]中国癌症流行病学与防治研究现状[J]. 曾红梅,陈万青. 化学进展. 2013(09)
[4]SMYD3调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖机制的研究[J]. 任天年,何赟绵,汤锋,张婷,沈晶,奚涛. 药学进展. 2012(02)
[5]Efficient production of omega-3 fatty acid desaturase （sFat-1）-transgenic pigs by somatic cell nuclear transfer[J]. PAN DengKe1, ZHANG Li1, ZHOU YanRong2, FENG Chong1, LONG Chuan1, LIU Xiao1, WAN Rong3, ZHANG Jian3, LIN AiXing3, DONG EnQiu4, WANG ShuChen4, XU HouGang4 & CHEN HongXing2 1 Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China; 2 Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100071, China; 3 China Agricultural University, Beijing 100193, China; 4 Yutian Breeding Swine Farms, Yutian 064104, China. Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[6]组蛋白甲基转移酶SMYD3在不同HBV表达水平肝癌细胞中的差异表达[J]. 何军,马兆龙,陈立波,王国斌. 世界华人消化杂志. 2008(18)
[7]Silencing SMYD3 in hepatoma demethylates RIZI promoter induces apoptosis and inhibits cell proliferation and migration[J]. Li-Bo Chen, Jun-Yao Xu, Zhen Yang, Guo-Bin Wang Li-Bo Chen, Guo-Bin Wang, Hepatobiliary center, Union Hospital of Huazhong University of Science & Technology, Wuhan 430022, Hubei province, China Jun-Yao Xu, Department of General Surgery, The Second Affiliated Hospital of Sun Yat-seu University, Guangzhou 510120, Guangdong province, China Zhen Yang, Department of integrated surgery, Tongji Hospital of Huazhong University of Science & Technology, Wuhan 430030, Hubei province, China. World Journal of Gastroenterology. 2007(43)
[8]RNA干扰SMYD3基因表达对诱导肝癌细胞凋亡的影响[J]. 徐鋆耀,陈立波,徐鋆阳,杨镇,魏海燕,许荣华. 癌症. 2006(05)
博士论文
[1]重编程的CRISPR-Cas9对HPV6/11 E7基因转化细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究[D]. 刘宇辰.安徽医科大学 2015
[2]利用CRISPR/Cas9进行基因编辑[D]. 沈彬.南京大学 2014
[3]ZFNs介导的牛MSTN位点的基因打靶研究[D]. 赵宇航.内蒙古大学 2014
硕士论文
[1]利用锌指核酶技术制备MSTN基因敲除的牛胎儿成纤维细胞[D]. 云亭.内蒙古大学 2013
本文编号：3047901
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