组蛋白甲基化酶G9a在套细胞淋巴瘤发生发展中的作用研究

发布时间：2021-02-25 04:42

　　[研究目的]套细胞淋巴瘤（Mantle cell lymphoma,MCL）为非霍奇金B细胞淋巴瘤,经检测发现,在大量病人中特异性存在t（11;14）（q13;q32）,并因此导致cyclinDl过度表达。套细胞淋巴瘤病发率偏低,仅为5%-10%,但其预后极差,容易复发,是中位生存期最短的淋巴瘤亚型,大约为3-5年。G9a（Euchromatic histone-lysine N-methyltransferase 2,也称作EHMT2）是研究比较广泛的组蛋白赖氨酸甲基化转移酶,其在多种肿瘤中出现异常表达增高,并与肿瘤增殖、凋亡、侵袭等生物学功能有关,但其在MCL中尚未有研究。本实验旨在研究G9a在MCL中表达情况及其在套细胞淋巴瘤发生发展中的作用机制。第一部分G9a在套细胞淋巴瘤中表达情况及甲基化芯片分析[方法]1.收集山东大学齐鲁医院2006年至2017年之间套细胞淋巴瘤病例及淋巴结反应性增生病例,分别收集到39例及20例病例,利用免疫组化方法检测实验组与对照组中G9a蛋白的表达。2.在实验组中选取4例G9a高表达病例,4例淋巴结反应性增生病例,使用Illumina甲基化芯片分析全... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
中英文缩写词对照
前言
第一部分 G9a在套细胞淋巴瘤中表达及相关甲基化芯片分析
    材料与方法
        1 临床标本收集
        2 免疫组化
            2.1 免疫组化相关仪器
            2.2 免疫组化主要试剂
            2.3 免疫组化实验步骤
        3 Infinium Hunan Methylation 850 BeadChip全基因组甲基化芯片
        4 相关芯片验证实验
            4.1 实验仪器
            4.2 实验用品
            4.3 试剂配制
            4.4 实验方法及步骤
                4.4.1 提取石蜡包埋组织标本的DNA
                4.4.2 DNA浓度测定
                4.4.3 DNA亚硫酸氢盐修饰
                4.4.4 BSP
    实验结果
第二章 G9a特异性抑制剂BIX01294对MCL细胞系组蛋白甲基化情况及对肿瘤细胞相关功能影响
    材料与方法
        1 细胞培养
            1.1 细胞株
            1.2 主要仪器
            1.3 主要试剂
            1.4 实验方法和步骤
        2 Western Blot
            2.1 主要仪器
            2.2 主要试剂
            2.3 常用液体配制
            2.4 实验方法及步骤
        3 CCK8细胞增殖实验
            3.1 实验仪器
            3.2 实验试剂
            3.3 实验方法及步骤
        4 细胞凋亡实验
            4.1 主要仪器
            4.2 主要试剂
            4.3 实验方法及步骤
        5 细胞周期实验
            5.1 主要仪器
            5.2 主要试剂
            5.3 实验方法及步骤
        6 统计分析
    实验结果
第三章 寻找G9a相互作用蛋白及相关下游靶基因研究
    材料与方法
        1 免疫共沉淀
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 实验方法及步骤
        2 Hela细胞转染shRNA
            2.1 质粒提取
                2.1.1 主要仪器
                2.1.2 主要试剂
                2.1.3 试剂配制
                2.1.4 实验方法及步骤
            2.2 Hela细胞培养
                2.2.1 主要仪器
                2.2.2 主要试剂
                2.2.3 实验方法及步骤
            2.3 细胞转染
                2.3.1 转染序列
                2.3.2 主要试剂
                2.3.3 实验方法及步骤
            2.4 Wester blot
                2.4.1 主要仪器
                2.4.2 主要试剂
                2.4.3 实验方法及步骤
        3 慢病毒转染Jeko-1细胞
            3.1 主要仪器
            3.2 主要试剂
            3.3 实验方法及步骤
        4 表达谱芯片
    实验结果
讨论
结论与展望
附录
参考文献
致谢
学位论文评阅及答辩情况表



本文编号：3050460