c-Myc通过调节组蛋白H 4 的乙酰化及CDK1和cyclinB表达影响G 2 /M期转化过程

发布时间：2021-02-26 22:25

　　背景:c-Myc原癌基因是Myc基因家族的主要成员之一,是骨髓性细胞白血病病毒的癌基因v-Myc的同类物,在8q24.12-8q24.13染色体上定位,该基因编码产物为c-Myc蛋白。c-Myc蛋白是一个具有螺旋环螺旋/亮氨酸拉链的转录因子,它能够调节细胞的增殖。c-Myc蛋白和Max蛋白可以在螺旋环螺旋/亮氨酸拉链处形成二聚体,c-Myc/Max复合物可以绑定DNA的E-box区（5’CANNTG 3’）,该区域一般是启动子所在位置。在人类的很多肿瘤细胞中c-Myc蛋白均高表达,其原因是c-Myc基因发生了突变或是被大量转录。B-lineage acute lymphoblastic leukemia（B-ALL）是一种急性B淋巴瘤白血病,具有很强的增殖能力和侵染能力,c-Myc在该类疾病的发生在扮演着重要角色,但其治病机制尚不清楚。为了进一步阐述其致病机理,该实验中我们用Raji细胞建立了c-Myc细胞沉默模型Raji-KD,发现c-Myc可以通过影响组蛋白乙酰基转移酶TIP60,MOF的表达来影响组蛋白H₄的乙酰化,从而调节CDK1,cyclin B1的表达... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 c-Myc-siRNA Raji细胞沉默模型和恢复模型的构建和鉴定
    材料和方法
        1.实验材料
            1.1 实验对象
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 相关试剂配制
        2.实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 c-Myc基因的逆转录病毒载体包装与沉默模型和恢复恢复模型构建
                2.2.1 最佳干扰序列的筛选和病毒包装
                2.2.2 Raji-KD细胞模型建立
                2.2.3 Raji-KD-Re细胞模型建立
            2.3 蛋白质免疫印迹分析（western bloting）
            2.4 实时荧光定量PCR分析（Real-time PCR）
            2.5 抗体稀释倍数
    结果
        （1）c-Myc最佳干扰序列的PCR检测
        （2）pSINsi-hU6-c-Myc重组质粒转染Raji细胞
        （3）稳定下调c-Myc表达单克隆及恢复c-Myc表达细胞株的鉴定
    讨论
    结论
第二部分 c-Myc蛋白的低表达对Raji细胞增殖能力的影响
    材料和方法
        1.实验材料
            1.1 实验对象
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 相关试剂配制
        2.实验方法
            2.1 细胞活力测定（MTT、BrdU）
            2.2 动物实验
    结果
        （1）MTT、BrdU检测细胞活性及SCID小鼠体内实体瘤的形成
    讨论
    结论
第三部分 c-Myc蛋白的低表达对Raji细胞周期及细胞凋亡的影响
    材料和法
        1.实验材料
            1.1 实验对象
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 相关试剂配制
        2.实验方法
            2.1 细胞周期检测
            2.2 细胞凋亡检测
            2.3 免疫组化
    结果
        （1）c-Myc蛋白低表达对Raji-KD细胞周期影响
        （2）c-Myc蛋白低表达对Raji-KD细胞凋亡影响
    讨论
    结论
第四部分 c-Myc通过组蛋白乙酰基转移酶的表达影响细胞周期
    材料和方法
        1.实验材料
            1.1 实验对象
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 相关试剂配制
        2.实验方法
            2.1 实时荧光定量PCR分析
            2.2 染色体免疫共沉淀（ChIP）
    结果
        （1）c-Myc调控周期蛋白CDK1、cyclinB和乙酰基转移酶Tip60
4的乙酰化引起周期蛋白cyclinB和CDK1等周期基因的变化">        （2） c-Myc通过组蛋白H₄的乙酰化引起周期蛋白cyclinB和CDK1等周期基因的变化
    讨论
    结论
参考文献
综述 c-Myc与肿瘤的发生及其生物学功能
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3053261