自噬对粒细胞样髓源性抑制细胞生存与功能的影响

发布时间：2021-03-01 22:15

　　目的:初步探索自噬对Lewis肺癌移植瘤小鼠脾脏中粒细胞样髓源性抑制细胞（granulocytic myeloid derived suppressor cells,G-MDSCs）体外存活能力与抑制性功能分子的影响。方法:Lewis肺癌细胞系体外培养后,构建小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型,通过免疫磁珠分选方法获得脾脏G-MDSCs,与荧光抗体（Ly-6C-FITC/Ly-6GPE/CD11b-PE/CY5）孵育后,流式细胞术检测G-MDSCs细胞纯度;瑞吉染色后观察其形态特征;采用雷帕霉素和氯喹处理后,通过蛋白质印迹法和流式细胞术检测自噬标志性分子微管相关蛋白1-轻链3Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3Ⅱ,LC3-Ⅱ）蛋白的表达水平。培养体系中加入雷帕霉素和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）,7-AAD染色检测自噬对G-MDSCs生存的影响;提取细胞总蛋白后检测胞内精氨酸酶的水平。结果:通过磁珠分选的方法可从小鼠脾脏中获得纯度较高的G-MDSCs,其细胞核呈环状或分叶状。雷帕霉素处理GM... 

【文章来源】：江苏大学学报(医学版). 2020,30(06)

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【部分图文】：

自噬对G-MDSCs存活的影响

分离纯化G-MDSCs细胞，小鼠体内G-MDSCs表型为CD11b+Ly-6G+Ly-6Clow，对细胞进行荧光抗体染色标记后通过流式细胞术检测磁珠分选获得的G-MDSCs纯度，结果显示G-MDSCs纯度达95%以上(图1)。2.2 G-MDSCs形态的鉴定

获得G-MDSCs之后，采用瑞士吉姆萨染色对其形态进行鉴定(图2)。结果显示涂片染色良好，细胞完整，细胞核呈环状或分叶状，与文献中所描述的G-MDSCs形态一致[3]。2.3 雷帕霉素促进G-MDSCs自噬


本文编号：3058108