恶性胸水的临床特征分析及胸水CTC检测的临床意义研究
发布时间：2021-03-05 05:01
目的:本研究回顾性分析了207例恶性胸腔积液患者的临床特征资料,并探讨应用循环肿瘤细胞的检测方法检测胸腔积液肿瘤细胞的临床意义。方法:第一部分研究筛选陕西省肿瘤医院2013年1月至2017年12月间住院的恶性胸腔积液患者的临床资料进行回顾性分析;第二部分研究另外纳入2018年1月至2019年12月就诊陕西省肿瘤医院的54例胸腔积液患者,分为两组,恶性肿瘤组即脱落细胞学检测或组织活检证实为恶性胸腔积液患者,33例;良性对照组即符合临床诊断为非恶性肿瘤相关疾病,或已经确诊的良性疾病合并胸腔积液患者,21例。两组均采集患者外周血及胸腔积液标本,使用CTCs检测法检测并比较肿瘤细胞含量。绘制CTCs检测的ROC曲线,评价CTCs检测法检测胸腔积液肿瘤细胞的潜在应用价值。随访并记录33例恶性肿瘤患者的生存信息,统计分析不同基线CTCs计数患者中位生存期的差异,评价该项检测技术在预后预测方面的临床意义。结果:1.207例恶性胸腔积液患者中,男116例,占56.0%;女91例,占44.0%;最大年龄82岁,最小年龄8岁,患者平均年龄（61.16±12.55）岁。原发肿瘤,肺癌137例,占66.1%,...
【文章来源】：西安医学院陕西省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MPE的发病机制（图片来源：SpellaM,etal.JournalofThoracicDisease,2015,7(6):1009-1020）
西安医学院临床医学硕士专业学位论文13中发现了与肿瘤细胞形态相似的一类细胞，将其命名为循环肿瘤细胞（CTCs），由于当时技术条件的限制，人们无法分离鉴定出活的CTCs。1976年，Nowell将CTCs的概念修正为—来自肿瘤原发部位或转移灶，可脱离基底膜并入侵组织基质进入血管的一类肿瘤细胞。目前，CTCs是指存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。1989年，英国病理学家Paget在Ashworth理论的基础上提出了特定组织器官的微环境（“土壤”）可影响特定肿瘤细胞（“种子”）的种植、侵袭、存活、生长，即著名的“种子和土壤”假说，此假说成功地揭示了肿瘤转移的机理。但是，即便外周血中检测到CTCs也并不代表肿瘤已经发生转移，只有极小一部分能力强的CTCs逃避免疫系统识别后，侵入第二器官形成微转移灶，CTCs才会发展成为肿瘤远处转移（见图2）。因此，CTCs的形成被认为是肿瘤转移的必要前提。图2CTCs和肿瘤转移（图片来源：DanilaDC,etal.CancerJ.2011,17(6):438-450.）肿瘤周围的微环境随着肿瘤不断生长而发生特殊改变，一些上皮来源的肿瘤细胞脱离原发灶进入血液循环后，通常需要经历上皮-间质转化（epithelialmesenchymaltransition，EMT）这一过程[37,38]。一般正常的上皮细胞通过黏附分子锚定在细胞外基质，并且细胞与细胞之间紧密相连，相对稳定难以发生迁移，而间质细胞间很少有细胞连接，结构松散，且分散于细胞外基质中，易发生迁移。当肿瘤细胞发生侵袭和转移时，细胞表型也随即发生改变，逐渐丧失上皮细胞的表型，获得一些间质细胞的表型，从而失去与细胞间的紧密连接及细胞外基质间的锚定，继而穿透血管内皮进入外周血液循环，这一过程称为EMT（见图3）。EMT是上皮来源的肿瘤细胞
西安医学院临床医学硕士专业学位论文18图4CTCs的富集和鉴定技术。亲和性富集法中靶向EpCAM蛋白的免疫磁性试剂是其中最常用的。非亲和性的CTCs富集技术包括基于细胞大小和基于细胞密度的技术。而且，去除阴性细胞或肿瘤细胞侵袭力的技术也被采用。集合不同富集技术的策略也是可行的。使用肿瘤特异性标记抗体的免疫组化技术，或针对肿瘤特异性mRNA或DNA序列的PCR技术捕获的肿瘤细胞可用来分析其分子特征。另一个方法是通过蛋白质分泌技术检测可见的细胞，而且FISH技术可用来检测肿瘤特异性基因异常。（图片来源：JoosseSA,etal.EMBOMolMed.,2015,7(1):1-11.）2.4FR阳性CTCs的研究叶酸受体（folatereceptor，FR）是一种跨膜单链糖蛋白，目前已知FR有α、β、γ三种亚型。FRα、β、γ的信号肽中分别含有25、19、23个氨基酸残基；FRα具有Asn-69、Asn-161、Asn-201三个潜在的N-糖基化位点，FRβ则具有Asn-99、Asn-179两个糖基化位点。不同亚型的FR的组织特异性不同，FRα仅在极少数正常组织中低表达，而在上皮来源的恶性肿瘤细胞表面高表达，如卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌等；FRβ在头颈部鳞状细胞癌及一些非上皮来源的肿瘤细胞表面高表达；FRγ在少数血液系统恶性肿瘤中过量表达。与其他肿瘤标记物相比,FR的优势不仅在于其配体叶酸易通过γ-羧基与其他分子结合,且不会降低其亲和力，还能通过内吞作用有效地将叶酸及其偶合物运入细胞内。
本文编号：3064622
【文章来源】：西安医学院陕西省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MPE的发病机制（图片来源：SpellaM,etal.JournalofThoracicDisease,2015,7(6):1009-1020）
西安医学院临床医学硕士专业学位论文13中发现了与肿瘤细胞形态相似的一类细胞，将其命名为循环肿瘤细胞（CTCs），由于当时技术条件的限制，人们无法分离鉴定出活的CTCs。1976年，Nowell将CTCs的概念修正为—来自肿瘤原发部位或转移灶，可脱离基底膜并入侵组织基质进入血管的一类肿瘤细胞。目前，CTCs是指存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。1989年，英国病理学家Paget在Ashworth理论的基础上提出了特定组织器官的微环境（“土壤”）可影响特定肿瘤细胞（“种子”）的种植、侵袭、存活、生长，即著名的“种子和土壤”假说，此假说成功地揭示了肿瘤转移的机理。但是，即便外周血中检测到CTCs也并不代表肿瘤已经发生转移，只有极小一部分能力强的CTCs逃避免疫系统识别后，侵入第二器官形成微转移灶，CTCs才会发展成为肿瘤远处转移（见图2）。因此，CTCs的形成被认为是肿瘤转移的必要前提。图2CTCs和肿瘤转移（图片来源：DanilaDC,etal.CancerJ.2011,17(6):438-450.）肿瘤周围的微环境随着肿瘤不断生长而发生特殊改变，一些上皮来源的肿瘤细胞脱离原发灶进入血液循环后，通常需要经历上皮-间质转化（epithelialmesenchymaltransition，EMT）这一过程[37,38]。一般正常的上皮细胞通过黏附分子锚定在细胞外基质，并且细胞与细胞之间紧密相连，相对稳定难以发生迁移，而间质细胞间很少有细胞连接，结构松散，且分散于细胞外基质中，易发生迁移。当肿瘤细胞发生侵袭和转移时，细胞表型也随即发生改变，逐渐丧失上皮细胞的表型，获得一些间质细胞的表型，从而失去与细胞间的紧密连接及细胞外基质间的锚定，继而穿透血管内皮进入外周血液循环，这一过程称为EMT（见图3）。EMT是上皮来源的肿瘤细胞
西安医学院临床医学硕士专业学位论文18图4CTCs的富集和鉴定技术。亲和性富集法中靶向EpCAM蛋白的免疫磁性试剂是其中最常用的。非亲和性的CTCs富集技术包括基于细胞大小和基于细胞密度的技术。而且，去除阴性细胞或肿瘤细胞侵袭力的技术也被采用。集合不同富集技术的策略也是可行的。使用肿瘤特异性标记抗体的免疫组化技术，或针对肿瘤特异性mRNA或DNA序列的PCR技术捕获的肿瘤细胞可用来分析其分子特征。另一个方法是通过蛋白质分泌技术检测可见的细胞，而且FISH技术可用来检测肿瘤特异性基因异常。（图片来源：JoosseSA,etal.EMBOMolMed.,2015,7(1):1-11.）2.4FR阳性CTCs的研究叶酸受体（folatereceptor，FR）是一种跨膜单链糖蛋白，目前已知FR有α、β、γ三种亚型。FRα、β、γ的信号肽中分别含有25、19、23个氨基酸残基；FRα具有Asn-69、Asn-161、Asn-201三个潜在的N-糖基化位点，FRβ则具有Asn-99、Asn-179两个糖基化位点。不同亚型的FR的组织特异性不同，FRα仅在极少数正常组织中低表达，而在上皮来源的恶性肿瘤细胞表面高表达，如卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌等；FRβ在头颈部鳞状细胞癌及一些非上皮来源的肿瘤细胞表面高表达；FRγ在少数血液系统恶性肿瘤中过量表达。与其他肿瘤标记物相比,FR的优势不仅在于其配体叶酸易通过γ-羧基与其他分子结合,且不会降低其亲和力，还能通过内吞作用有效地将叶酸及其偶合物运入细胞内。
本文编号：3064622
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