SALL4调控糖酵解促进胃癌恶性进展作用及机制
发布时间：2021-03-08 14:50
目的:研究SALL4（spalt-like transcription factor 4,婆罗双树样基因4）在胃癌细胞糖酵解中的作用,探讨SALL4通过调控HK-2（hexokinase II,己糖激酶II）的表达影响胃癌细胞糖酵解水平从而促进其恶性进展的具体机制,为揭示SALL4与胃癌细胞糖酵解、胃癌恶性进展关系提供理论基础和实验依据,并为胃癌分子诊断、诊疗、临床预后评估提供新的思路和靶点。方法:根据SALL4表达情况选取两对胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901和HGC-27、AGS分别进行SALL4敲减和过表达实验。利用葡萄糖摄取、乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平和己糖激酶活性分析试剂盒检测胃癌细胞的糖酵解水平。采用qRT-PCR和Western blot检测SALL4、糖酵解相关基因和蛋白的表达变化。随后采用基因芯片技术初步筛出SALL4的下游靶标。再采用双荧光素酶报告基因实验验证胃癌细胞中SALL4对HK-2基因的结合作用以及利用染色质免疫共沉淀实验验证SALL4对HK-2基因的调控作用。采用Transwell迁移实验、Matrigel侵袭实验、细胞计数实验和克隆形成...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SALL4siRNA干扰和质粒过表达的效率鉴定
SALL4调控糖酵解促进胃癌恶性进展作用及机制223.3.2siRNA干扰SALL4表达对胃癌细胞糖酵解的影响在胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中，干扰SALL4表达后，分别用试剂盒检测胃癌细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平，结果显示，与对照组相比，干扰SALL4后，MGC-803和SGC-7901的葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平均下降，证明了SALL4水平降低后，下调了胃癌细胞MGC-803和SGC-7901的糖酵解水平（图3.2A，B）。AB图3.2siRNA干扰SALL4表达对胃癌细胞糖酵解的影响(A，B)干扰SALL4表达后，检测MGC-803细胞和SGC-7901细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平。**P<0.01，***P<0.001。Figure3.2EffectofsiRNAinterferencewithSALL4expressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfterinterferingwiththeexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofMGC-803cellsandSGC-7901cellsweredetected.**P<0.01,***P<0.001.3.3.3SALL4过表达对胃癌细胞糖酵解的影响在胃癌细胞HGC-27和AGS中，过表达SALL4后，分别用试剂盒检测胃癌细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平，结果显示，与对照组相比，过表达SALL4后，HGC-27和AGS的葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢
江苏大学硕士学位论文23酶活性、ATP水平均上升，证明了SALL4水平上调后，增加了胃癌细胞HGC-27和AGS的糖酵解水平（图3.3A，B）。AB图3.3SALL4过表达对胃癌细胞糖酵解的影响(A，B)过表达SALL4后，检测HGC-27细胞和AGS细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。Figure3.3EffectofSALL4overexpressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfteroverexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofHGC-27cellsandAGScellsweredetected.*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001.3.3.4siRNA干扰SALL4对胃癌细胞糖酵解相关基因和蛋白表达的影响体外实验发现SALL4能够影响胃癌细胞糖酵解水平，KEGG分析基因芯片结果也显示了SALL4能够影响糖酵解通路（图3.4A），因此我们进一步探讨在胃癌细胞中糖酵解相关基因和蛋白是否能够被SALL4影响其表达。用SALL4siRNA干扰MGC-803和SGC-7901细胞的SALL4的表达，qRT-PCR检测了一些糖酵解相关的基因的变化。与对照组相比，在MGC-803细胞中，si-SALL4组HK-2、LDHA、PGK1（phosphoglyceratekinase1,磷酸甘油酸激酶1）基因均下调（图3.4B）；而在SGC-7901细胞中，si-SALL4组HK-2、LDHA、PGK1、PFKL(6-phosphofructokinase，livertype，6-磷酸果糖激酶，肝型)、GLUT1、PKM2的表达均发生了降低（图3.4C）。Westernblot结果显示，与对照组相比，两种
【参考文献】：
期刊论文
[1]糖代谢异常和炎症对胃癌的影响[J]. 朱军民,陈刚,秦俊杰,张敏敏,张有成. 兰州大学学报(医学版). 2018(01)
[2]Warburg效应关键酶在胃癌中的研究进展[J]. 杨少华,蔡寨,厉周. 消化肿瘤杂志(电子版). 2017(02)
[3]Glucose metabolism in gastric cancer: The cutting-edge[J]. Lian-Wen Yuan,Hiroharu Yamashita,Yasuyuki Seto. World Journal of Gastroenterology. 2016(06)
[4]己糖激酶Ⅱ与肿瘤研究进展[J]. 罗贵娟,缪明永. 中华普通外科学文献(电子版). 2013(01)
[5]己糖激酶与恶性肿瘤关系的研究进展[J]. 赵迎超,伍钢. 肿瘤防治研究. 2006(09)
本文编号：3071231
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SALL4siRNA干扰和质粒过表达的效率鉴定
SALL4调控糖酵解促进胃癌恶性进展作用及机制223.3.2siRNA干扰SALL4表达对胃癌细胞糖酵解的影响在胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中，干扰SALL4表达后，分别用试剂盒检测胃癌细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平，结果显示，与对照组相比，干扰SALL4后，MGC-803和SGC-7901的葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平均下降，证明了SALL4水平降低后，下调了胃癌细胞MGC-803和SGC-7901的糖酵解水平（图3.2A，B）。AB图3.2siRNA干扰SALL4表达对胃癌细胞糖酵解的影响(A，B)干扰SALL4表达后，检测MGC-803细胞和SGC-7901细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平。**P<0.01，***P<0.001。Figure3.2EffectofsiRNAinterferencewithSALL4expressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfterinterferingwiththeexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofMGC-803cellsandSGC-7901cellsweredetected.**P<0.01,***P<0.001.3.3.3SALL4过表达对胃癌细胞糖酵解的影响在胃癌细胞HGC-27和AGS中，过表达SALL4后，分别用试剂盒检测胃癌细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平，结果显示，与对照组相比，过表达SALL4后，HGC-27和AGS的葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢
江苏大学硕士学位论文23酶活性、ATP水平均上升，证明了SALL4水平上调后，增加了胃癌细胞HGC-27和AGS的糖酵解水平（图3.3A，B）。AB图3.3SALL4过表达对胃癌细胞糖酵解的影响(A，B)过表达SALL4后，检测HGC-27细胞和AGS细胞葡萄糖摄娶乳酸生成、乳酸脱氢酶活性、ATP水平。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。Figure3.3EffectofSALL4overexpressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfteroverexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofHGC-27cellsandAGScellsweredetected.*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001.3.3.4siRNA干扰SALL4对胃癌细胞糖酵解相关基因和蛋白表达的影响体外实验发现SALL4能够影响胃癌细胞糖酵解水平，KEGG分析基因芯片结果也显示了SALL4能够影响糖酵解通路（图3.4A），因此我们进一步探讨在胃癌细胞中糖酵解相关基因和蛋白是否能够被SALL4影响其表达。用SALL4siRNA干扰MGC-803和SGC-7901细胞的SALL4的表达，qRT-PCR检测了一些糖酵解相关的基因的变化。与对照组相比，在MGC-803细胞中，si-SALL4组HK-2、LDHA、PGK1（phosphoglyceratekinase1,磷酸甘油酸激酶1）基因均下调（图3.4B）；而在SGC-7901细胞中，si-SALL4组HK-2、LDHA、PGK1、PFKL(6-phosphofructokinase，livertype，6-磷酸果糖激酶，肝型)、GLUT1、PKM2的表达均发生了降低（图3.4C）。Westernblot结果显示，与对照组相比，两种
【参考文献】：
期刊论文
[1]糖代谢异常和炎症对胃癌的影响[J]. 朱军民,陈刚,秦俊杰,张敏敏,张有成. 兰州大学学报(医学版). 2018(01)
[2]Warburg效应关键酶在胃癌中的研究进展[J]. 杨少华,蔡寨,厉周. 消化肿瘤杂志(电子版). 2017(02)
[3]Glucose metabolism in gastric cancer: The cutting-edge[J]. Lian-Wen Yuan,Hiroharu Yamashita,Yasuyuki Seto. World Journal of Gastroenterology. 2016(06)
[4]己糖激酶Ⅱ与肿瘤研究进展[J]. 罗贵娟,缪明永. 中华普通外科学文献(电子版). 2013(01)
[5]己糖激酶与恶性肿瘤关系的研究进展[J]. 赵迎超,伍钢. 肿瘤防治研究. 2006(09)
本文编号：3071231
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