利用噬菌体展示技术筛选靶向胰腺癌细胞肽段并利用凋亡—靶向融合肽段抑制胰腺癌生长
发布时间：2021-03-08 18:07
背景:胰腺癌（Pancreatic cancer,PC）在消化系统中属于恶性程度很高的肿瘤。早期胰腺癌由于其非典型的临床症状以及早期筛查指标缺乏特异性,通常难以诊断,从而失去了进行根治性手术切除的机会。而晚期胰腺癌对临床放射疗法和化学疗法的敏感性较低,而且放化疗副作用对病人身体影响较大,胰腺癌患者的预后很差。我们想通过提高抗肿瘤药物的靶向性,从而提高抗肿瘤药物对胰腺癌的疗效并降低对机体正常细胞的损伤。在靶向性问题上,我们利用噬菌体展示技术进行筛选。在抗肿瘤药物上,我们选择了KLA（（KLAKLAK）2）凋亡肽作为治疗肽段,KLA凋亡肽段与化学治疗药物相比,具有分子量小、肿瘤穿透能力强、免疫原性低、生物相容性好、毒性作用小、易于合成和修饰等优点[12-13],是理想的抗肿瘤药物。但KLA凋亡肽很难透过细胞膜,无法进入细胞后就不能破坏线粒体膜以诱导细胞凋亡[16]。因此本研究旨在通过利用噬菌体展示技术,筛选出能特异性作用于胰腺癌细胞的靶向肽段。利用该肽段的靶向性,实现对胰腺癌的影像学诊断。并利用该肽段结合凋亡肽段KLA,以期实现融合肽段对胰腺癌细胞具有靶向性并对胰腺癌细胞及肿瘤的生长有抑制...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
融合肽段HMNPWSD-KLA在体外细胞及体内肿瘤靶向性评估
浙江大学博士学位论文正文第二部分结果37图2.2融合肽段HMNPWSD-KLA对细胞MTT试验。分别设立PBS组，KLA组，Control-KLA组及HMNPWSD-KLA组。不同浓度肽段分别与(A)PANC-1细胞及(B)H1299细胞共孵育24h后，进行MTT测定。MTT结果测定显示，KLA、control-KLA在PANC-1细胞及对照组H1299细胞中，均未有明显的细胞生长抑制作用。HMNPWSD-KLA融合肽段在PANC-1细胞中有较高的细胞生长抑制效果，而在对照细胞H1299则无明显的生产抑制作用，进一步证明了HMNPWSD-KLA融合肽段对PANC-1细胞的靶向性。2.3.3融合肽段通过破坏线粒体，诱导细胞凋亡，抑制细胞生长我们已经验证了融合肽段HMNPWSD-KLA能够对PANC-1细胞生长抑制。我们猜想融合肽段发挥生长抑制作用是通过KLA肽段的线粒体破坏，诱导细胞凋亡。为了进一步研究融合肽段HMNPWSD-KLA抑制PANC-1细胞生长机制。我们首先用不同浓度的融合肽段作用于PANC-1细胞，然后进行细胞凋亡检测。图2.3A所示，细胞发生凋亡程度与融合肽段剂量成依赖性关系，随着融合肽段
浙江大学博士学位论文正文第二部分结果39图2.3融合肽段抑制PANC-1细胞生长机制。(A)流式细胞凋亡分析。利用不同浓度（0,5M,10Mand20M）融合肽段作用于PANC-1细胞后，凋亡分析结果显示，随融合肽段HMNPWSD-KLA浓度不断增加，发生凋亡的细胞数量相
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pathology of pancreatic ductal adenocarcinoma:Facts,challenges and future developments[J]. Irene Esposito,Bj?rn Konukiewitz,Anna Melissa Schlitter,Günter Kl?ppel. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[2]Laparoscopic spleen-preserving distal pancreatectomy for pancreatic neoplasms:A retrospective study[J]. Jia-Fei Yan,Xiao-Wu Xu,Wei-Wei Jin,Chao-Jie Huang,Ke Chen,Ren-Chao Zhang,Ajoodhea Harsha,Yi-Ping Mou. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[3]Pancreatic cancer: Advances in treatment[J]. Somala Mohammed,George Van Buren Ⅱ,William E Fisher. World Journal of Gastroenterology. 2014(28)
[4]噬菌体展示技术及其应用[J]. 刘相叶,邓洪宽,吴秀萍,王学林,于申业,于艳玲,刘明远. 动物医学进展. 2008(01)
[5]利用pⅧ展示系统改进噬菌体抗体芯片[J]. 廖玮,洪龙,魏芳,朱圣庚,赵新生. 物理化学学报. 2005(05)
[6]单链抗体（ScFv）表达载体的构建及抗 HBs ScFv 的表达[J]. 王琰,刘群英,高荣凯,朱迎春,化冰,王雅明,徐建军. 中华微生物学和免疫学杂志. 1997(01)
本文编号：3071439
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
融合肽段HMNPWSD-KLA在体外细胞及体内肿瘤靶向性评估
浙江大学博士学位论文正文第二部分结果37图2.2融合肽段HMNPWSD-KLA对细胞MTT试验。分别设立PBS组，KLA组，Control-KLA组及HMNPWSD-KLA组。不同浓度肽段分别与(A)PANC-1细胞及(B)H1299细胞共孵育24h后，进行MTT测定。MTT结果测定显示，KLA、control-KLA在PANC-1细胞及对照组H1299细胞中，均未有明显的细胞生长抑制作用。HMNPWSD-KLA融合肽段在PANC-1细胞中有较高的细胞生长抑制效果，而在对照细胞H1299则无明显的生产抑制作用，进一步证明了HMNPWSD-KLA融合肽段对PANC-1细胞的靶向性。2.3.3融合肽段通过破坏线粒体，诱导细胞凋亡，抑制细胞生长我们已经验证了融合肽段HMNPWSD-KLA能够对PANC-1细胞生长抑制。我们猜想融合肽段发挥生长抑制作用是通过KLA肽段的线粒体破坏，诱导细胞凋亡。为了进一步研究融合肽段HMNPWSD-KLA抑制PANC-1细胞生长机制。我们首先用不同浓度的融合肽段作用于PANC-1细胞，然后进行细胞凋亡检测。图2.3A所示，细胞发生凋亡程度与融合肽段剂量成依赖性关系，随着融合肽段
浙江大学博士学位论文正文第二部分结果39图2.3融合肽段抑制PANC-1细胞生长机制。(A)流式细胞凋亡分析。利用不同浓度（0,5M,10Mand20M）融合肽段作用于PANC-1细胞后，凋亡分析结果显示，随融合肽段HMNPWSD-KLA浓度不断增加，发生凋亡的细胞数量相
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pathology of pancreatic ductal adenocarcinoma:Facts,challenges and future developments[J]. Irene Esposito,Bj?rn Konukiewitz,Anna Melissa Schlitter,Günter Kl?ppel. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[2]Laparoscopic spleen-preserving distal pancreatectomy for pancreatic neoplasms:A retrospective study[J]. Jia-Fei Yan,Xiao-Wu Xu,Wei-Wei Jin,Chao-Jie Huang,Ke Chen,Ren-Chao Zhang,Ajoodhea Harsha,Yi-Ping Mou. World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[3]Pancreatic cancer: Advances in treatment[J]. Somala Mohammed,George Van Buren Ⅱ,William E Fisher. World Journal of Gastroenterology. 2014(28)
[4]噬菌体展示技术及其应用[J]. 刘相叶,邓洪宽,吴秀萍,王学林,于申业,于艳玲,刘明远. 动物医学进展. 2008(01)
[5]利用pⅧ展示系统改进噬菌体抗体芯片[J]. 廖玮,洪龙,魏芳,朱圣庚,赵新生. 物理化学学报. 2005(05)
[6]单链抗体（ScFv）表达载体的构建及抗 HBs ScFv 的表达[J]. 王琰,刘群英,高荣凯,朱迎春,化冰,王雅明,徐建军. 中华微生物学和免疫学杂志. 1997(01)
本文编号：3071439
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