TET1-CD去甲基化激活抑癌基因抑制肝细胞癌

发布时间：2021-03-09 19:56

　　目的:探索DNA双加氧酶TET1催化结构域（TET1-CD）在肝细胞癌中发挥的去甲基化作用,探讨其在细胞和动物水平上对肝细胞癌的治疗作用。方法:1.RT-qPCR和Western Blot分别检测LO2细胞和SMMC 7721细胞中TET1mRNA以及蛋白表达水平;2.以LO2细胞c DNA为模板,根据TET1基因序列（GenBank:NM₀30625）设计上下游引物,获得TET1-CD目的片段,克隆至真核细胞表达载体pflag-CMV4中,构建重组表达质粒pflag-TET1-CD（p-TET1-CD）。采用点突变技术,将TET1蛋白的的1672位组氨酸突变为酪氨酸,1674位的天冬氨酸突变为丙氨酸（H1672Y,D1674A）,以pflag-TET1-CD重组质粒为模板,设计上下游突变引物,获得突变重组表达质粒pflag-TET1-mCD（p-TET1-mCD）;3.Control,p-TET1-CD和p-TET1-mCD质粒分别转染SMMC 7721细胞,亚硫酸氢盐测序法（BSP）检测三组细胞中抑癌基因TET1,P16,SOCS1,APC和RASSF1A以及... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
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中英文对照词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验主要试剂和材料
        2.1.1 细胞株及质粒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 实验主要设备和仪器
        2.1.4 实验主要试剂的配制
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 RT-qPCR
        2.2.3 WesternBlot
        2.2.4 重组表达质粒pflag-TET1-CD构建
        2.2.5 重组突变表达质粒pflag-TET1-mCD构建
        2.2.6 基因转导技术
        2.2.7 亚硫酸氢盐测序法（BSP）
        2.2.8 CellCountingKit（CCK8）
        2.2.9 kFluor594Click-ItEDU成像检测
        2.2.10 细胞划痕
        2.2.11 细胞迁移和侵袭
        2.2.12 动物实验
        2.2.13 数据处理
第3章 结果
    3.1 SMMC7721细胞中TET1表达水平下降
    3.2 重组表达载体P-TET1-CD和P-TET1-MCD的测序鉴定
    3.3 TET1-CD去甲基化TSGS启动子
    3.4 TET1-CD上调TSGSMRNA水平
    3.5 TET1-CD抑制SMMC7721细胞增殖
    3.6 TET1-CD抑制SMMC7721细胞迁移和侵袭
    3.7 TET1-CD抑制裸鼠肿瘤生长
    3.8 TET1-CD影响KI-67蛋白表达
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3073387