circZNF609在结直肠癌中的表达及参与细胞凋亡功能的研究
发布时间：2021-03-11 14:36
第一部分CircZNF609在结直肠癌组织及血清中的表达目的:探究CircZNF609在结直肠癌患者癌组织和血清中的表达是否存在差异。方法:1.将4%多聚甲醛固定的组织进行脱水、包埋、切片,之后进行HE染色;2.提取组织及血清RNA、反转录、RT-PCR检测并验证CircZNF609在结直肠患者癌组织和血清中的表达水平。结果:首先,针对CircZNF609设计特异性的扩增引物,证实CircZNF609在结直肠组织中存在表达。收集45例结直肠癌患者术后结直肠癌组织及癌旁正常组织标本,检测CircZNF609在癌组织及癌旁正常组织中表达,结果显示结直肠癌组织中CircZNF609的表达显著低于癌旁正常组织（P<0.05）。进一步结合患者临床病理参数分析,结果显示CircZNF609的表达与肿瘤直径密切相关（P<0.05）,而与患者性别、年龄、肿瘤分化、肿瘤形态、血管及神经浸润等临床病理因素无关。此外,患者血清检测结果表明结直肠癌患者血清中CircZNF609的表达低于健康体检人群（P<0.05）。结论:cir c ZNF609在结直肠癌癌组织中表达水平下降。CircZNF...
【文章来源】：河北医科大学河北省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
circZNF609在CRC组织中的表达Fig.2TheexpressionofcircZNF609inCRCtissues
17meterwaslargeandtheexpressionlevelofcircZNF609waslow(P＜0.05).4.circZNF609在血清中的表达为了评估circZNF609是否可以作为结直肠癌患者诊断的潜在生物标志物，分别检测了46例结直肠癌患者及46例健康体检人群血清样本中circZNF609的表达是否存在差异。RT-PCR结果表明结直肠癌患者血清中circZNF609的表达低于健康体检人群（见图4A，P<0.05）。为进一步评价circZNF609作为血清诊断标志物的诊断价值，建立了受试者工作特征曲线（ROC，见图4B），其灵敏度为0.65，特异度为0.80。曲线下面积（AUC）为0.77（95%CI,0.670-0.86），以上结果提示circZNF609可能成为结直肠癌诊断的潜在生物标志物。图4circZNF609在血清中的表达Fig.4TheexpressionofcircZNF609inserumFig.4ART-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609inserum.TheresultsshowedthattheexpressionofcircZNF609intheserumofcolorectalcancerpatientswaslowerthanthatofhealthypeople（P＜0.05）.Fig.4BReceiveroperatingcharacteristic(ROC)curveanalysiswasusedtoverifythediagnosticvalueofcircZNF609asaserumbiomarker.Thesensitivityandspecifcitywere0.65and0.80,respectively.Theareaunderthecurve(AUC)was0.77(95%CI,0.67–0.86),andthecutovaluewas6.915.
35结果1.circZNF609在结直肠癌细胞中的表达首先，RT-PCR检测了三种细胞中circZNF609的表达，结果显示circZNF609在HCT116和HT29人结肠癌细胞中的表达显著低于正常结直肠粘膜细胞FHC（P＜0.05，见图1），且HCT116细胞中降低最为明显，故选择HCT116细胞进行后续细胞功能试验。图1circZNF609在细胞中的表达Fig.1TheexpressionofcircZNF609incells.Fig.1RT-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609incells.TheexpressionofcircZNF609inhumancolorectalcancercellsofHCT116andHT29wassignificantlylowerthannormalcolorectalmucosalFHCcell（P＜0.05）.2.circZNF609过表达质粒的构建为进一步探究circZNF609的功能，构建circZNF609的过表达载体。首先，设计含有EcoRⅤ和SacⅡ酶切位点的特异性引物扩增ZNF609成环片段的全长线性序列，琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物长度正确（全长序列见circBaseID:hsa_circ_0000615,见图2A）。通过双酶切位点，将扩增片段插入pcDNA3.1(+)CircRNAMiniVector，构建重组质粒pcDNA3.1-circZNF609。重组质粒测序证实插入序列准确无误，circZNF609过表达载体构建成功。质粒提取试剂盒提取质粒后，使用Lipofectamine2000转染试剂，转染HCT116细胞24h，RT-PCR结果显示circZNF609在HCT116细胞中过表达成功（P＜0.05，见图2B）。
本文编号：3076621
【文章来源】：河北医科大学河北省
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
circZNF609在CRC组织中的表达Fig.2TheexpressionofcircZNF609inCRCtissues
17meterwaslargeandtheexpressionlevelofcircZNF609waslow(P＜0.05).4.circZNF609在血清中的表达为了评估circZNF609是否可以作为结直肠癌患者诊断的潜在生物标志物，分别检测了46例结直肠癌患者及46例健康体检人群血清样本中circZNF609的表达是否存在差异。RT-PCR结果表明结直肠癌患者血清中circZNF609的表达低于健康体检人群（见图4A，P<0.05）。为进一步评价circZNF609作为血清诊断标志物的诊断价值，建立了受试者工作特征曲线（ROC，见图4B），其灵敏度为0.65，特异度为0.80。曲线下面积（AUC）为0.77（95%CI,0.670-0.86），以上结果提示circZNF609可能成为结直肠癌诊断的潜在生物标志物。图4circZNF609在血清中的表达Fig.4TheexpressionofcircZNF609inserumFig.4ART-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609inserum.TheresultsshowedthattheexpressionofcircZNF609intheserumofcolorectalcancerpatientswaslowerthanthatofhealthypeople（P＜0.05）.Fig.4BReceiveroperatingcharacteristic(ROC)curveanalysiswasusedtoverifythediagnosticvalueofcircZNF609asaserumbiomarker.Thesensitivityandspecifcitywere0.65and0.80,respectively.Theareaunderthecurve(AUC)was0.77(95%CI,0.67–0.86),andthecutovaluewas6.915.
35结果1.circZNF609在结直肠癌细胞中的表达首先，RT-PCR检测了三种细胞中circZNF609的表达，结果显示circZNF609在HCT116和HT29人结肠癌细胞中的表达显著低于正常结直肠粘膜细胞FHC（P＜0.05，见图1），且HCT116细胞中降低最为明显，故选择HCT116细胞进行后续细胞功能试验。图1circZNF609在细胞中的表达Fig.1TheexpressionofcircZNF609incells.Fig.1RT-PCRswereconductedtodetecttheexpressionofcircZNF609incells.TheexpressionofcircZNF609inhumancolorectalcancercellsofHCT116andHT29wassignificantlylowerthannormalcolorectalmucosalFHCcell（P＜0.05）.2.circZNF609过表达质粒的构建为进一步探究circZNF609的功能，构建circZNF609的过表达载体。首先，设计含有EcoRⅤ和SacⅡ酶切位点的特异性引物扩增ZNF609成环片段的全长线性序列，琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物长度正确（全长序列见circBaseID:hsa_circ_0000615,见图2A）。通过双酶切位点，将扩增片段插入pcDNA3.1(+)CircRNAMiniVector，构建重组质粒pcDNA3.1-circZNF609。重组质粒测序证实插入序列准确无误，circZNF609过表达载体构建成功。质粒提取试剂盒提取质粒后，使用Lipofectamine2000转染试剂，转染HCT116细胞24h，RT-PCR结果显示circZNF609在HCT116细胞中过表达成功（P＜0.05，见图2B）。
本文编号：3076621
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