胰腺癌外泌体介导T细胞免疫抑制的机制研究

发布时间：2021-03-26 11:46

　　背景胰腺癌是恶性程度极高的恶性肿瘤之一,近年来虽然手术切除率和根治率有所提升,但5年生存率仍在8%左右。胰腺癌的免疫微环境以免疫抑制性T细胞聚集为特征,多种途径诱导的免疫逃逸是胰腺癌极早期即可发生淋巴结和远处转移的重要原因,因此预后极差。外泌体是直径50-150 nm的细胞外囊泡,作为一种细胞间通讯载体,通过抑制免疫应答及诱导免疫抑制性分子的方式参与免疫调节。然而,胰腺癌来源的外泌体通过何种途径诱导免疫抑制性T细胞来介导免疫逃逸,具体机制尚未完全阐明。目的本研究旨在探索胰腺癌来源的外泌体对T细胞基因表达、免疫表型及免疫功能的影响,为阐明胰腺癌的免疫逃逸机理及探索精准免疫治疗提供理论依据。方法采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离纯化外周血T淋巴细胞并进行体外培养;采用超速离心法提取胰腺癌细胞培养上清液中的外泌体,并使用电子显微镜、粒径分析及分子标记物Western Blot检测对提取的外泌体进行纯度鉴定;将提纯的胰腺癌细胞来源外泌体用于刺激体外培养的T淋巴细胞。使用CD63-td Tomato标记外泌体并用于刺激体外培养的T淋巴细胞,使用共聚焦显微镜追踪T淋巴细胞对外泌体的摄取情况。通过... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：147 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

BxPC-3外泌体鉴定。A:电镜观察外泌体,外泌体为黑色箭头所指;B:外泌体粒径分析及电位检测;C:Western Blot检测外泌体标志蛋白。

CD63是胰腺癌来源外泌体的标记物,我们用融合了荧光蛋白tdTomato的CD63过表达慢病毒来感染Bx PC-3,构建tdTomato-BxPC-3稳转株(图2A)。从tdTomato-BxPC-3培养上清液中分离出携带荧光的tdTomato-exosomes,可用于外泌体示踪。共聚焦显微镜观察发现T细胞本身不携带tdTomato荧光,tdTomato-exosomes刺激的T细胞携带tdTomato荧光(图2B),说明人外周血T细胞摄取胰腺癌来源的外泌体。1.3.3外泌体抑制T细胞杀肿瘤细胞效应

T细胞通过细胞毒活性杀伤肿瘤细胞,杀肿瘤效应是T细胞在肿瘤免疫中的重要功能。我们将Ctrl-T或Exo-T作为杀伤细胞,Bx PC-3或PANC-1作为靶细胞,两者在体外共培养48h,通过检测靶细胞生长状态来反应T细胞的杀肿瘤效应。单独培养的胰腺癌细胞作为内参,其生长状态最好,与Exo-T共培养胰腺癌细胞的生长状态次之,与Ctrl-T共培养胰腺癌细胞的生长状态最差(图3A)。这些结果说明,与Ctrl-T相比,Exo-T的杀肿瘤效应显著减弱。1.3.4外泌体诱导T细胞免疫抑制性表型

【参考文献】：
期刊论文
[1]Complex role for the immune system in initiation and progression of pancreatic cancer[J]. Kristin S Inman,Amanda A Francis,Nicole R Murray.  World Journal of Gastroenterology. 2014(32)
[2]运用抗PD-L1抗体治疗晚期癌症患者的安全性与疗效评价[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow.  肿瘤药学. 2012(03)



本文编号：3101528