钙调磷酸酶PPP3CB调控肾癌细胞生长、迁移的作用及机制研究

发布时间：2021-04-11 12:55

　　目的:探究钙调磷酸酶PPP3CB与转录因子TWIST1相互作用调控肾癌（Renal cell carcinoma,RCC）发生发展,并阐述其机制。方法:基于课题组以往研究中质谱分析结果显示,PPP3CB在上皮样肾脏间充质细胞m K4中高表达,在间质样肾脏间充质细胞m K3细胞中低表达,因此我们进一步在肾癌细胞系中研究PPP3CB是否在肾癌上皮间质转化（EMT）及发生发展中发挥调节作用。肿瘤蛋白数据库分析显示,PPP3CB低表达于肾癌组织,因此我们在肾癌细胞系786-O和OSRC-2中进行如下实验:体外,在786-O和OSRC-2细胞中通过慢病毒感染方式,构建PPP3CB过表达和敲低的稳定细胞系或利用lipofectamine2000转染si RNA-PPP3CB;通过划痕/Transwell实验,检测PPP3CB对细胞迁移能力的影响,通过Western-blot和免疫荧光实验检测PPP3CB对EMT过程及TWIST1的影响,鬼笔环肽染色F-actin检测细胞骨架改变;在HEK 293FT细胞中,通过Co-IP实验检测PPP3CB与TWIST1相互作用;在PPP3CB稳定细胞系或转染si... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PPP3CB在肾癌细胞中低表达Figure1PPP3CBwasexpressedlowerinRCCcell

重庆医科大学博士研究生学位论文41图2.1流式细胞凋亡检测显示PPP3CB促进786-O细胞凋亡Figure2.1PPP3CBacceleratedcellapoptosisin786-Ocell

重庆医科大学博士研究生学位论文42图2.2PPP3CB促进剪切的促凋亡蛋白Caspase3表达Figure2.2PPP3CBfacilitatedtheexpressionofpro-apoptoticproteincleaved-Caspase3in786-OandOSRC-2cell此外，为探讨PPP3CB对细胞增殖的影响，我们针对慢病毒敲低的786-O细胞，进一步通过CCK-8实验检测细胞活力，结果表明敲低PPP3CB后细胞活力受到抑制，差异有统计学意义，但并不非常显著（图2.3A）。为得到更确切的结果，我们在786-O细胞中通过siRNA高效率沉默PPP3CB，重复CCK-8实验，结果与shRNA干预结果一致，且差异非常显著（图2.3B-C）。同时，我们进行EdU细胞增殖实验，从另一方法学角度明确敲低PPP3CB对细胞增殖的抑制作用（图2.3D-E）。这些结果表明PPP3CB促进细胞凋亡，抑制细胞增殖。


本文编号：3131293