Pokemon对三阴性乳腺癌干细胞干性的促进作用及机制

发布时间：2021-04-14 09:11

　　目的:明确转录因子Pokemon对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）干细胞干性特征的促进作用,初步探讨Pokemon促进TNBC干细胞干性特征的作用机制,为TNBC尤其是难治性TNBC的治疗提供潜在靶点。方法:以体外培养的人TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T为实验对象,通过Transwell实验检测沉默Pokemon后TNBC细胞的侵袭能力变化情况;通过微球体培养实验检测沉默Pokemon后MDA-MB-231和HS-578T细胞形成微球体的数目及体积的变化情况;通过Aldeflour测定法检测在MDA-MB-231和HS-578T细胞中沉默Pokemon后乙醛脱氢酶ALDH+干/祖细胞亚群比例变化情况。为探索Pokemon调控TNBC干细胞干性特征的初步作用机制,通过全基因组表达谱芯片筛选出在MDA-MB-231细胞中沉默Pokemon后变化最大的干性因子,并通过TCGA数据库分析其与Pokemon的相关性,再进一步通过qRT-PCR及Western blot技术验证Pokemon下调后该干性因子的变化情况;此外,通过... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

沉默Pokemon可以抑制TNBC细胞的侵袭能力

344.2沉默Pokemon可显著抑制TNBC干细胞的干性4.2.1通过微球体形成实验来验证沉默Pokemon对TNBC干细胞干性的影响情况为了探索转录因子Pokemon对三阴性乳腺癌干细胞的干性影响，我们通过微球体形成实验来鉴定在TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T中沉默Pokemon后其干细胞成球能力，以验证转录因子Pokemon对TNBC细胞干性的影响情况。我们发现在TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T中沉默Pokemon后，与对照组相比，其微球体形成的数目减少，同时形成的微球体的体积也明显变小，并且三次重复实验计算成球数目所得数据具有统计学意义，表明沉默Pokemon可显著抑制TNBC干细胞的干性（图4.2）。图4.2沉默Pokemon对TNBC干细胞干性具有抑制作用。（A）根据微球体培养实验，在MDA-MB-231和HS-578T细胞中，沉默Pokemon显著减少了TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T形成的微球体的数目和体积。（B）结果显示为具有平均值±sd的柱状图，n=3个独立实验。统计显著性由Student"st-test确定。**P<0.01.放大倍数40X,比例尺代表100μm。

354.2.2通过Aldeflour测定法来验证沉默Pokemon对TNBC细胞干性的影响情况我们通过Aldeflour测定法检测沉默Pokemon后对TNBC群中干细胞群比例的变化情况，探讨转录因子Pokemon对对三阴性乳腺癌干细胞干性的影响情况。我们发现，在TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T中，沉默Pokemon后，与对照组相比，ALDH+细胞群的比例明显降低，并且三次重复实验所得数据具有统计学意义，表明沉默Pokemon可显著抑制TNBC干细胞的干性（图4.3）。图4.3沉默Pokemon对TNBC干细胞具有抑制作用。（A）在MDA-MB-231和HS-578T细胞中，根据ALDH测定法，检测沉默Pokemon降低了TNBC细胞系MDA-MB-231和HS-578T中ALDH+细胞群的比例。（B）结果显示为具有平均值±sd的柱状图，n=3个独立实验。统计显著性由Student"st-test确定。*P<0.05。4.3全基因组芯片筛选沉默Pokemon后变化倍数最大的干性指标为了进一步明确沉默Pokemon后对TNBC干细胞干性影响的关键靶点，我们通过全基因组表达谱芯片分析发现，Pokemon下调后可以影响一系列包括CD24，CD44，ALDH1A1，KLF4，KLF5，SOX2，SOX8，SOX9，NANOG，

【参考文献】：
期刊论文
[1]泛素-蛋白酶体系统与精子DNA损伤修复的研究进展[J]. 张国巍,蔡鸿财,商学军.  中华男科学杂志. 2016(09)



本文编号：3137066