UBE2M与LSD1相互作用以及其对胃癌细胞增殖和迁移影响的研究

发布时间：2021-04-23 12:20

　　组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶（Histone lysine specific demethylase 1,LSD1）是在2004年发现的第一种组蛋白去甲基化酶。LSD1能够以黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin adenine dinucleotide,FAD）依赖性酶催化氧化的方式去除组蛋白H3K4和H3K9的单双甲基。蛋白neddylation修饰作为一种类泛素化修饰,是机体发挥正常功能的调节方式,然而在肿瘤及神经退行性等疾病中却发生异常活化,neddylation通路E1激活酶NAE的抑制剂MLN4924已经进入临床前研究,发现其对多种肿瘤都有很好的抑制活性。然而最近研究发现MLN4924在肿瘤治疗过程中出现抗性,以及neddylation通路的E2结合酶UBE2M被证实在肺癌中是一种很好的治疗靶点。课题组前期发现LSD 1可以增强胃癌细胞MGC-803的迁移和侵袭。本文意在研究（1）LSD1是否存在neddylation修饰以及UBE2M是否会对其产生影响;（2）UBE2M是否对胃癌细胞的增殖与迁移产生影响以及LSD1在其中是否发挥作用。（1）LSD1与UBE2M/UBE2F在胃癌... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
符号说明
1 前言
    1.1 表观遗传学
    1.2 染色质结构
    1.3 DNA甲基化
    1.4 组蛋白的共价修饰
        1.4.1 甲基化修饰
        1.4.2 乙酰化修饰
        1.4.3 磷酸化修饰
        1.4.4 其它修饰
    1.5 LSD1
        1.5.1 LSD1的结构与功能
        1.5.2 LSD1在癌症发生与进展中的作用
    1.6 蛋白的neddylation修饰
        1.6.1 NEDD8的结构
        1.6.2 Neddylation修饰的相关作用酶
        1.6.3 以neddylation修饰为靶点的抗肿瘤研究
    1.7 EMT
    1.8 本论文的主要研究目的和研究内容
2 UBE2M与LSD1在胃癌组织中表达量的相关性分析
    引言
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 常用溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 免疫组化
        2.2.2 统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 LSD1与UBE2M在胃癌组织中表达量的相关性分析
        2.3.2 LSD1与UBE2F在胃癌组织中表达量的相关性分析
    小结
3 LSD1 neddylation修饰的确定及LSD1与UBE2M相互作用的研究
    引言
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 实验试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞的复苏、传代与冻存
        3.2.2 蛋白质的提取
        3.2.3 BCA蛋白定量
        3.2.4 Western-blot实验
        3.2.5 质粒提取实验
        3.2.6 细胞转染实验
        3.2.7 免疫共沉淀实验
        3.2.8 细胞免疫荧光实验
        3.2.9 蛋白质谱分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 质谱分析UBE2M与LSD1的相互作用以及鉴定LSD1的neddylation修饰
        3.3.2 UBE2M与LSD1存在共定位
        3.3.3 UBE2M与LSD1蛋白间存在着结合作用
    小结
4 UBE2M相互作用蛋白对于LSD1 neddylation修饰作用影响以及UBE2M对LSD1蛋白表达量的调节
    引言
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 实验试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞转染实验
        4.2.2 免疫共沉淀实验
        4.2.3 Western-blot实验
        4.2.4 体外neddylation实验
    4.3 实验结果
        4.3.1 利用UBE2M抗体免疫共沉淀得到的蛋白复合物可以促进重组LSD1的neddylation修饰
        4.3.2 胃癌细胞中敲低以及过表达UBE2M后LSD1表达量的变化
    小结
5 UBE2M对胃癌细胞增殖与迁移性能的调控及LSD1在其中作用的研究
    引言
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验仪器
        5.1.2 实验试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 MTT实验
        5.2.2 划痕实验
        5.2.3 细胞转染实验
        5.2.4 Western-blot实验
    5.3 实验结果
        5.3.1 敲低UBE2M对于六种胃癌细胞增殖的影响
        5.3.2 过表达UBE2M对于六种胃癌细胞增殖的影响
        5.3.3 敲低UBE2M对于胃癌细胞MGC-803和MGC-803 （LSD1 knockout）迁移的影响
        5.3.4 过表达UBE2M对于胃癌细胞MGC-803和MGC-803 （LSD1 knockout）迁移的影响
    小结
结论
参考文献
个人简历与研究成果
    个人简历
    硕士在读期间论文发表成果
    研究生期间的荣誉与奖励
致谢



本文编号：3155318