Exosomal PD-L1和免疫模型对晚期肿瘤预后及免疫治疗疗效的影响和机制研究

发布时间：2021-04-26 07:51

　　目的:晚期恶性肿瘤的治疗主要以放疗、化疗和靶向治疗为主,多种方法综合治疗能够改善晚期肿瘤患者的总生存,提高患者生活质量,但总体获益有限。如今,免疫治疗,特别是免疫检查点抑制剂已经成为抗肿瘤治疗的热点和革新,为晚期肿瘤的治疗提供了新的方法。在免疫检查点通路中,程序性细胞死亡蛋白1（Programmed death-1,PD-1）及其配体（Programmed death-ligand-1,PD-L1）是其中的主要研究对象。两者之间的结合能够抑制T细胞的活化和功能,具有促进肿瘤免疫逃逸、进展和转移的重要作用。PD-1或PD-L1单克隆抗体可以通过阻断PD-1与PD-L1之间的连接来诱导抗肿瘤免疫应答。近年来,免疫检查点抑制剂等各种类型的免疫疗法已开展了众多临床试验,并被批准用于治疗多种晚期恶性肿瘤。总体而言,单药PD-1单抗治疗的有效率较低,仅为10%～25%,而现有疗效预测因子有限。因此,能够有效预测抗PD-1治疗疗效生物标志物的研究亟待开展。作为靶通路的关键因子,通过免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）检测在肿瘤组织中PD-L1的表达,仅在晚期肺癌一线应用... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :exosomal PD-L1 对晚期胃癌患者预后影响及其机制
    1前言
    2 材料与方法
        2.1 试剂
        2.2 仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 病例收集
            2.3.2 血浆标本收集
            2.3.3 Exosomes分离提纯
            2.3.4 外周血单核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）分离
            2.3.5 流式细胞计数
            2.3.6 细胞培养及细胞来源外泌体的收集
            2.3.7 ELISA法
            2.3.8 在线数据库进行免疫组化和生存分析
            2.3.9 透射电镜
            2.3.10 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 晚期胃癌患者一般情况
        3.2 晚期胃癌患者外泌体及exosomal PD-L1 的鉴定
        3.3 exosomal PD-L1、soluble PD-L1 在晚期胃癌患者血浆中的表达水平
        3.4 exosomal PD-L1、soluble PD-L1 表达对晚期胃癌患者预后的影响
        3.5 exosomal PD-L1 的单因素及多因素结果
        3.6 验证集中生存曲线验证exosomal PD-L1 对于晚期胃癌的预后价值
        3.7 时间依赖的ROC曲线检测exosomal PD-L1 预后效率
        3.8 exosomal PD-L1 表达与T细胞数量、免疫相关细胞因子的关系
        3.9 在线数据分析免疫相关因子影响胃癌预后
        3.10 Exosomal PD-L1 促进活化的T细胞凋亡
        3.11 Exosomal PD-L1 表达与耗竭型T细胞比例相关
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :exosomal PD-L1 联合CD28 预测晚期恶性肿瘤患者抗PD-1 治疗疗效
    6前言
    7 材料与方法
        7.1 试剂
        7.2 仪器
        7.3 实验方法
            7.3.1 病例收集
            7.3.2 血浆标本收集
            7.3.3 Exosomes分离提纯
            7.3.4 Western blot检测蛋白水平
            7.3.5 ELISA法
            7.3.6 流式细胞计数
            7.3.7 MILLIPLEX多因子检测
            7.3.8 透射电镜
            7.3.9 统计学分析
    8 实验结果
        8.1 可溶型PD-L1 和可溶型PD-1 无法预测抗PD-1 治疗的反应
            8.1.1 患者基本信息情况
            8.1.2 可溶型PD-L1、可溶型PD-1与PD-1 单抗治疗疗效无关
        8.2 外泌体鉴定以及exosomal PD-L1、exosomal PD-1 检测
        8.3 基线exosomal PD-L1 高表达患者抗PD-1 治疗疗效更差
            8.3.1 基线exosomal PD-L1 水平与治疗疗效关系
            8.3.2 exosomal PD-L1 的动态变化与肿瘤负荷、疗效评价一致
        8.4 基线exosomal PD-1 高表达患者抗PD-1 治疗疗效更差
            8.4.1 基线exosomal PD-1 水平与治疗疗效关系
            8.4.2 exosomal PD-1 的动态变化与肿瘤负荷、疗效评价一致
        8.5 exosomal PD-L1 高表达与缩短的PD-1 单抗治疗PFS时间相关
            8.5.1 应用X-tlie选取各指标截断值
            8.5.2 PD-1单抗治疗PFS的影响因素
        8.6 PD-1单抗治疗有效组共刺激因子高表达
        8.7 共刺激因子高表达与PD-1单抗PFS时间延长相关
        8.8 PD-1单抗治疗有效组共抑制因子高表达
        8.9 共抑制因子高表达与PD-1单抗PFS时间延长相关
        8.10 T淋巴细胞相关细胞因子不能预测PD-1抑制剂的疗效
        8.11 exosomal PD-L1和CD28为PD-1 单抗治疗PFS的独立影响因素
            8.11.1 单因素分析显示exosomal PD-L1 高表达、共刺激因子低表达为PD-1 单抗治疗无进展生存期的不良因素
            8.11.2 多因素分析显示exosomal PD-L1和CD28是PD-1 单抗治疗疗效的独立预测因素
            8.11.3 亚组分析exosomal PD-L1和CD28对PD-1 单抗治疗PFS的影响
        8.12 Exosomal PD-L1与CD28 联合预测PD-1 单抗的疗效更好
            8.12.1 ROC曲线评价两指标联合预测效率
            8.12.2 两指标联合阳性患者具有更长的无进展生存期,更可能从PD-1单抗中获益
            8.12.3 列线图反应两指标联合预测PFS
        8.13 亚组分析验证模型对PD-1单抗疗效的预测
    9 讨论
    10 结论
第三部分 :生物信息学建立肺鳞癌中免疫炎症型基因模型及免疫治疗疗效预测
    11前言
    12 材料与方法
        12.1 肺鳞癌基因表达文件下载
        12.2 单样本基因集富集分析（ss GSEA）评估免疫细胞浸润
        12.3 加权基因共表达网络分析（WGCNA）
        12.4 基因语义注释（GO term）功能富集分析
        12.5 关键基因（hub gene）的定义
        12.6 最小绝对收缩和选择算子（LASSO）简化基因模型
    13 结果
        13.1 从TCGA、GSE50081 肺鳞癌数据集中筛选免疫相关模块
        13.2 两数据集得到的模块功能富集与免疫过程相关
        13.3 TCGA天青模块仅与免疫炎症型显著正相关
        13.4 两数据集Hub基因的交集与免疫功能相关
        13.5 51Hub基因仅与免疫炎症型显著正相关
        13.6 尿路上皮癌研究结果证实51基因模型与免疫炎症型密切相关,并与抗PD-L1治疗有效相关
        13.7 7基因模型与免疫炎症型密切相关,并与抗PD-L1治疗有效相关
        13.8 7基因模型阳性阈值的确定
        13.9 7基因的共线性和功能
        13.10 7基因模型在TCGA数据集中筛选炎症型肺鳞癌
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3161042