MERIT40增强PHGDH的酶活性并促进乳腺肿瘤的发展
发布时间：2021-04-28 09:28
乳腺癌是全球范围内女性最常见的恶性肿瘤之一,也是引起女性死亡的重要病因,研究乳腺癌相关的分子机制具有重要的意义。人类中,MERIT40基因所在位点是首个被发现的三阴性乳腺癌的风险位点。并且,该基因外显子区rs8170位TT基因型被发现与三阴性乳腺癌的高发病率相关。MERIT40蛋白是DNA双链损伤修复复合体BRCA1-A的组成成员之一,它的功能是维持整个BRCA1-A复合体的稳定性,促进复合体的组成并介导DNA损伤修复。为了探索MERIT40在乳腺癌中可能存在的新功能,我们实验室以MERIT40为饵进行了蛋白质间相互作用的筛查后发现PHGDH与MERIT40之间存在相互作用,并且在葡萄糖饥饿刺激下会增强这种相互作用。PHGDH是糖酵解——丝氨酸生物合成途径中的第一个分支酶,也是催化丝氨酸合成一系列反应的限速酶。许多研究证实,PHGDH高表达于多种乳腺癌中并与肿瘤细胞的生长息息相关,但其酶活调控机制仍不清楚。我们通过构建体外酶活测量体系发现,过表达MERIT40增强了PHGDH酶活力,而敲低MERIT40使PHGDH的酶活力降低了,体外回补MERIT40蛋白能够在一定程度上挽救由于MER...
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1.1 乳腺癌
1.1.1 乳腺癌简介
1.1.2 乳腺癌的流行现状和趋势
1.2 MERIT40与乳腺癌
1.2.1 MERIT40的简介
1.2.2 MERIT40的结构
1.2.3 MERIT40的功能
1.2.4 MERIT40与乳腺癌的关系
1.3 磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)
1.3.1 PHGDH简介
1.3.2 PHGDH的结构
1.3.3 PHGDH的调控
1.3.4 PHGDH与肿瘤的关系
1.4 立题背景
第二章 材料和方法
2.1 DNA相关实验
2.1.1 表达质粒的构建
2.1.2 干扰RNA表达质粒的构建
2.1.3 DNA片段的纯化
2.1.4 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.1.5 质粒DNA的提取
2.2 细胞相关实验
2.2.1 细胞培养
2.2.2 瞬时转染
2.2.3 慢病毒包装
2.2.4 慢病毒转染
2.2.5 细胞存活曲线测定
2.2.6 基质胶侵袭实验
2.2.7 细胞死亡检测
2.3 蛋白质相关实验方法
2.3.1 蛋白质的表达和纯化
2.3.2 免疫共沉淀
2.3.3 蛋白酶活的测定
2.3.4 蛋白质的SDS-PAGE电泳与western blot
2.3.5 考马斯亮蓝染色
2.4 抗体和试剂
2.5 实验仪器
2.6 免疫缺陷鼠肿瘤移植实验
2.7 统计分析
第三章 结果和讨论
3.1 结果
3.1.1 酶活测量体系的构建
3.1.2 MERIT40增强PHGDH的酶活
3.1.3 MERIT40增强了肿瘤细胞抵抗葡萄糖饥饿环境的能力
3.1.4 敲低MERIT40抑制小鼠乳腺原位移植瘤的生长
3.2 讨论
致谢
图表索引
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同剂量辐射对NOD/SCID小鼠肠损伤的影响[J]. 杜彬,原杰,任召祺,安媛,江峰,李军,杨超. 中国医学科学院学报. 2018(01)
[2]Preparation and analysis of cSNP chip on hepatocellular carcinoma-related genes[J]. College of Life Sciences, Shenzhen University, Shenzhen 518060, China( Wang J); College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071 ,China( Ni H, Chen L, Chen CB and Song WQ); and Tianjin Cancer Hospital, Tianjin 300060 , China(Liu YX). Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2005(03)
本文编号：3165236
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1.1 乳腺癌
1.1.1 乳腺癌简介
1.1.2 乳腺癌的流行现状和趋势
1.2 MERIT40与乳腺癌
1.2.1 MERIT40的简介
1.2.2 MERIT40的结构
1.2.3 MERIT40的功能
1.2.4 MERIT40与乳腺癌的关系
1.3 磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)
1.3.1 PHGDH简介
1.3.2 PHGDH的结构
1.3.3 PHGDH的调控
1.3.4 PHGDH与肿瘤的关系
1.4 立题背景
第二章 材料和方法
2.1 DNA相关实验
2.1.1 表达质粒的构建
2.1.2 干扰RNA表达质粒的构建
2.1.3 DNA片段的纯化
2.1.4 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.1.5 质粒DNA的提取
2.2 细胞相关实验
2.2.1 细胞培养
2.2.2 瞬时转染
2.2.3 慢病毒包装
2.2.4 慢病毒转染
2.2.5 细胞存活曲线测定
2.2.6 基质胶侵袭实验
2.2.7 细胞死亡检测
2.3 蛋白质相关实验方法
2.3.1 蛋白质的表达和纯化
2.3.2 免疫共沉淀
2.3.3 蛋白酶活的测定
2.3.4 蛋白质的SDS-PAGE电泳与western blot
2.3.5 考马斯亮蓝染色
2.4 抗体和试剂
2.5 实验仪器
2.6 免疫缺陷鼠肿瘤移植实验
2.7 统计分析
第三章 结果和讨论
3.1 结果
3.1.1 酶活测量体系的构建
3.1.2 MERIT40增强PHGDH的酶活
3.1.3 MERIT40增强了肿瘤细胞抵抗葡萄糖饥饿环境的能力
3.1.4 敲低MERIT40抑制小鼠乳腺原位移植瘤的生长
3.2 讨论
致谢
图表索引
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同剂量辐射对NOD/SCID小鼠肠损伤的影响[J]. 杜彬,原杰,任召祺,安媛,江峰,李军,杨超. 中国医学科学院学报. 2018(01)
[2]Preparation and analysis of cSNP chip on hepatocellular carcinoma-related genes[J]. College of Life Sciences, Shenzhen University, Shenzhen 518060, China( Wang J); College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071 ,China( Ni H, Chen L, Chen CB and Song WQ); and Tianjin Cancer Hospital, Tianjin 300060 , China(Liu YX). Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2005(03)
本文编号：3165236
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