基于开源节流策略的活性氧纳米生成器用于结肠癌治疗的研究
发布时间：2021-04-28 21:57
现如今,癌症成为威胁人类生命健康的一个重大疾病,声动力治疗（SDT）由于其独特的优点,如无创性、高特异性、治疗效果佳以及副作用小,引起了人们的广泛关注。活性氧（ROS）是声动力治疗发挥抗肿瘤作用的关键活性物质,然而,肿瘤乏氧微环境以及肿瘤细胞内抗氧化酶系的存在,导致SDT产生的ROS无法在肿瘤细胞内有效蓄积,极大的降低了 SDT抗肿瘤效果。因此,提高肿瘤细胞内活性氧产量成为增强声动力治疗效果的关键。本课题选用具有高超声敏感性和药物储库功能的中空介孔二氧化钛纳米粒（MTN）为基体,有效负载化疗药物硫酸博来霉素（BLM）和氧气饱和的全氟戊烷（PFP）,制备MTN-BLM-PFP。一方面,超声诱导PFP发生液-气相变以释放氧气,自供氧增加ROS的生成,BLM对超氧化物歧化酶（SOD）的抑制作用进一步减少ROS的清除,开源节流提高ROS在肿瘤部位的蓄积;另一方面,BLM结合肿瘤细胞内存在的铜离子后实现活化,活化的分子会切割双链DNA,进一步杀伤肿瘤细胞。然后使用红细胞膜（RBCm）对MTN-BLM-PFP进行包封（RBCm-MTN-BLM-PFP,简称为RMPB）,实现体内长循环和门控的作用,...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 前言
第二章 TKD@RMPB纳米制剂的制备及表征
1 仪器与试剂
1.1 仪器
1.2 试剂
2 实验内容
2.1 TTKD@RMPB的制备
2.1.1 MTN的制备
2.1.2 BLM的负载及含量测定
2.1.2.1 构建BLM的标准曲线
2.1.2.2 确定投料比
2.1.3 MTN-BLM-PFP的制备
2.1.4 RBCm的制备
2.1.5 TKD@RMPB的制备
2.2 TKD@RMPB的表征
2.2.1 透射电镜(TEM)表征
2.2.2 粒径分布及Zeta电位表征
2.2.3 氮气吸附-解吸实验
2.2.4 紫外-可见全波长扫描
2.2.5 荧光光谱扫描
2.3 氧气释放的测定
2.4 体外释药试验
2.5 SDS-PAGE蛋白表征
2.5.1 蛋白质标准曲线的构建
2.5.2 细胞膜蛋白的提取
2.5.3 SDS-PAGE凝胶电泳
3 结果与讨论
3.1 TKD@RMPB的表征
3.1.1 MTN的氮气吸附-解吸实验
3.1.2 TEM表征
3.1.3 紫外-可见全波长扫描
3.1.4 SDS-PAGE蛋白表征
3.1.5 荧光光谱扫描
3.1.6 制剂的电位考察和粒径分布
3.2 载药率和包封率的考察
3.2.1 BLM含量测定的建立
3.2.2 制剂的载药率和包封率
3.4 TKD@RMPB的超声响应特性考察
3.4.1 MTN在超声作用后的透射电镜表征
3.4.2 超声作用后氧气释放的测定
3.4.3 制剂的体外释药试验
4 本章小结
第三章 TKD@RMPB纳米制剂的体外抗肿瘤活性评价
1 仪器与试剂
1.1 仪器与设备
1.2 试剂
1.3 细胞株
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 细胞培养
2.1.1 RAW264.7巨噬细胞和人结肠癌细胞HT-29的复苏
2.1.2 细胞的传代
2.2 HT-29和RAW264.7细胞对制剂的摄取实验
2.3 超声刺激下TKD@RMPB的细胞核定位
2.4 细胞内ROS的测定
2.5 单细胞凝胶电泳实验
2.6 SRB法测定TKD@RMPB对HT-29细胞的抑制率
2.6.1 载体对HT-29细胞的毒性实验
2.6.2 制剂对HT-29细胞的毒性实验
2.7 Calcein-AM/PI染色法测定HT-29细胞活性
3 结果与讨论
3.1 HT-29和RAW264.7细胞对制剂的摄取实验
3.2 细胞核定位能力
3.3 细胞内ROS的测定
3.4 彗星实验结果
3.5 SRB法测定TKD@RMPB对HT-29细胞的抑制率结果
3.6 Calcein-AM/PI染色法测定HT-29细胞活性
4 本章小结
第四章 TKD@RMPB纳米靶向制剂的体内活性研究
1 仪器与试剂
1.1 仪器
1.2 试剂
1.3 实验动物
2 实验方法
2.0 HT-29荷瘤裸鼠模型的建立
2.1 纳米递药系统在HT-29荷瘤裸鼠的体内组织分布实验
2.2 药代动力学研究
2.3 TKD@RMPB在HT-29荷瘤裸鼠的药效学实验
2.3.1 实验分组与操作方法
2.3.2 H&E染色观察病理变化
2.3.3 免疫荧光染色检测体内ROS的产生
2.3.4 免疫组化技术观察肿瘤的乏氧状况
2.3.5 TUNEL染色法检测细胞凋亡
2.4 肺纤维化的评估
3 结果与讨论
3.1 纳米递药系统在HT-29荷瘤裸鼠的体内组织分布结果
3.2 药代动力学研究
3.3 TKD@RMPB在HT-29荷瘤裸鼠的药效学实验
3.3.1 治疗期间裸鼠肿瘤体积和体重的变化
3.3.2 H&E染色观察病理变化
3.3.3 免疫荧光染色检测体内ROS的产生
3.3.4 免疫组化技术观察肿瘤的乏氧状况
3.3.5 TUNEL染色法检测细胞凋亡
3.4 肺纤维化的评估
4 本章小结
第五章 全文总结
参考文献
个人简介
致谢
本文编号：3166243
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 前言
第二章 TKD@RMPB纳米制剂的制备及表征
1 仪器与试剂
1.1 仪器
1.2 试剂
2 实验内容
2.1 TTKD@RMPB的制备
2.1.1 MTN的制备
2.1.2 BLM的负载及含量测定
2.1.2.1 构建BLM的标准曲线
2.1.2.2 确定投料比
2.1.3 MTN-BLM-PFP的制备
2.1.4 RBCm的制备
2.1.5 TKD@RMPB的制备
2.2 TKD@RMPB的表征
2.2.1 透射电镜(TEM)表征
2.2.2 粒径分布及Zeta电位表征
2.2.3 氮气吸附-解吸实验
2.2.4 紫外-可见全波长扫描
2.2.5 荧光光谱扫描
2.3 氧气释放的测定
2.4 体外释药试验
2.5 SDS-PAGE蛋白表征
2.5.1 蛋白质标准曲线的构建
2.5.2 细胞膜蛋白的提取
2.5.3 SDS-PAGE凝胶电泳
3 结果与讨论
3.1 TKD@RMPB的表征
3.1.1 MTN的氮气吸附-解吸实验
3.1.2 TEM表征
3.1.3 紫外-可见全波长扫描
3.1.4 SDS-PAGE蛋白表征
3.1.5 荧光光谱扫描
3.1.6 制剂的电位考察和粒径分布
3.2 载药率和包封率的考察
3.2.1 BLM含量测定的建立
3.2.2 制剂的载药率和包封率
3.4 TKD@RMPB的超声响应特性考察
3.4.1 MTN在超声作用后的透射电镜表征
3.4.2 超声作用后氧气释放的测定
3.4.3 制剂的体外释药试验
4 本章小结
第三章 TKD@RMPB纳米制剂的体外抗肿瘤活性评价
1 仪器与试剂
1.1 仪器与设备
1.2 试剂
1.3 细胞株
1.4 主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 细胞培养
2.1.1 RAW264.7巨噬细胞和人结肠癌细胞HT-29的复苏
2.1.2 细胞的传代
2.2 HT-29和RAW264.7细胞对制剂的摄取实验
2.3 超声刺激下TKD@RMPB的细胞核定位
2.4 细胞内ROS的测定
2.5 单细胞凝胶电泳实验
2.6 SRB法测定TKD@RMPB对HT-29细胞的抑制率
2.6.1 载体对HT-29细胞的毒性实验
2.6.2 制剂对HT-29细胞的毒性实验
2.7 Calcein-AM/PI染色法测定HT-29细胞活性
3 结果与讨论
3.1 HT-29和RAW264.7细胞对制剂的摄取实验
3.2 细胞核定位能力
3.3 细胞内ROS的测定
3.4 彗星实验结果
3.5 SRB法测定TKD@RMPB对HT-29细胞的抑制率结果
3.6 Calcein-AM/PI染色法测定HT-29细胞活性
4 本章小结
第四章 TKD@RMPB纳米靶向制剂的体内活性研究
1 仪器与试剂
1.1 仪器
1.2 试剂
1.3 实验动物
2 实验方法
2.0 HT-29荷瘤裸鼠模型的建立
2.1 纳米递药系统在HT-29荷瘤裸鼠的体内组织分布实验
2.2 药代动力学研究
2.3 TKD@RMPB在HT-29荷瘤裸鼠的药效学实验
2.3.1 实验分组与操作方法
2.3.2 H&E染色观察病理变化
2.3.3 免疫荧光染色检测体内ROS的产生
2.3.4 免疫组化技术观察肿瘤的乏氧状况
2.3.5 TUNEL染色法检测细胞凋亡
2.4 肺纤维化的评估
3 结果与讨论
3.1 纳米递药系统在HT-29荷瘤裸鼠的体内组织分布结果
3.2 药代动力学研究
3.3 TKD@RMPB在HT-29荷瘤裸鼠的药效学实验
3.3.1 治疗期间裸鼠肿瘤体积和体重的变化
3.3.2 H&E染色观察病理变化
3.3.3 免疫荧光染色检测体内ROS的产生
3.3.4 免疫组化技术观察肿瘤的乏氧状况
3.3.5 TUNEL染色法检测细胞凋亡
3.4 肺纤维化的评估
4 本章小结
第五章 全文总结
参考文献
个人简介
致谢
本文编号：3166243
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3166243.html
