针对肿瘤微环境FAP蛋白的双特异性抗体的构建、表达和功能研究

发布时间：2021-05-08 07:12

　　[研究目的]大量研究与临床运用表明双特异抗体可以有效的治疗肿瘤。成纤维活化蛋白FAP（fibroblast activation protein）是肿瘤微环境基质中活化成纤维细胞表达的一种表面抗原,可以作为肿瘤的一种生物标志。FAP在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。因此本课题拟构建靶向于人FAP以及人T细胞表面CD3分子的双特异性抗体。本课题首先设计双特异性抗体结构,在确定结构基础上编辑抗体碱基序列,接下来包装慢病毒,并利用该慢病毒转染CHO细胞（中国苍鼠卵巢细胞）。通过这种生物工程方法表达设计好的双特异性抗体,在进行抗体提纯之后进行抗体分泌验证,确认分泌后进行抗体相关的功能验证,包括:结合能力验证、杀瘤能力验证。旨在研发靶点为人FAP/人CD3的双特异性抗体类药物,从而更有效安全的治疗肿瘤。[实验方法]1.双特异性抗体的构建:1.1双特异性抗体序列设计（序列包括:signal peptide、His Tag、lingker、抗体可变区VH、VL）。2.双特异性抗体的表达:2.1双特异性抗体相关序列慢病毒包装与对照用空载体NC慢病毒包装（包括:1.细胞培养2.病毒包装3.病毒收集4.病毒... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一部分: 携带FAP蛋白基因的重组慢病毒的构建
    一. 前言
    二. 材料与方法
        2.1. 实验仪器和材料
        2.2. 实验技术路线
        2.3. 实验方法
    三. 结果
        3.1. 重组质粒的酶切鉴定鉴定结果
        3.2. 测序分析
        3.3. 慢病毒感染宿主细胞
        3.4. Hm326抗体的表达检测及抗体超滤纯化
    四. 讨论
    五. 结论
    参考文献
第二部分: 双特异性抗体的功能研究
    一. 前言
    二. 对象与方法
        2.1. 研究对象
        2.2. 主要的实验设备及仪器
        2.3. 主要的试剂和材料
        2.4. 实验方法
    三. 结果
        3.1 肿瘤组织中FAP蛋白的表达检测
        3.2 构建多个FAP蛋白过表达细胞系
        3.3 Hm326抗体与靶点结合实验
        3.4 外周血诱导CIK细胞
        3.5 Hm326抗体体外杀瘤实验
    四. 讨论
    五. 结论
    参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章及科研项目情况
致谢



本文编号：3174908