CYLD在黑色素瘤发生中的作用及分子机制

发布时间：2021-05-12 15:58

　　黑色素瘤（Melanoma）是由黑色素细胞恶性转化而产生的恶性肿瘤之一,多发生于皮肤。皮肤恶性黑色素瘤多数由正常的痣和色素斑演变形成,其生长速度快,转移性强,死亡率高,其发生的分子机制尚不完全清楚,探究其发病机制对黑色素瘤的机制阐明以及治疗具有重要意义。圆柱瘤基因（Cylindromatosis,CYLD）是一种肿瘤抑制基因,其突变与人类家族性圆柱瘤等肿瘤的发生有着密切的关系。CYLD广泛分布于人体细胞内,是一种与微管结合的去泛素化酶,可以调节蛋白质的泛素化水平,在炎症反应、细胞增殖和迁移等多种生物学过程中发挥作用。我们通过肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中的皮肤黑色素瘤患者样本数据,分析了CYLD在皮肤黑色素瘤中的表达,发现其在患者中低表达,其表达量与生存时间密切相关,提示CYLD在皮肤恶性黑色素瘤发生中发挥重要作用。然而,CYLD在皮肤黑色素瘤中作用及其分子机制尚不完全清楚,基于此,本论文利用人恶性皮肤黑色素瘤细胞系,探究CYLD在肿瘤细胞增殖前移中的作用及其分子机制。本研究首先提取了肿瘤基因组图谱（the cancer genome... 

【文章来源】：山东师范大学山东省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 黑色素瘤(Melanoma)
    1.2 圆柱瘤基因(Cylindromatosis,CYLD)
        1.2.1 圆柱瘤基因CYLD的发现
        1.2.2 圆柱瘤基因CYLD的结构和特征
        1.2.3 CYLD在肿瘤中发挥的作用和机制
    1.3 泛素(Ubiquitin,Ub)和泛素化
        1.3.1 泛素
        1.3.2 泛素化
        1.3.3 泛素化在肿瘤中发挥的作用和机制
    1.4 核仁磷酸蛋白(Nucleophosmin,NPM/B23)
        1.4.1 NPM结构和特征
        1.4.2 NPM在肿瘤中发挥的作用和机制
    1.5 论文研究的目的和意义
第二章 CYLD在皮肤恶性黑色素瘤中的表达
    2.1 实验材料与试剂
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验主要试剂配制方法
    2.2 实验方法
        2.2.1 TCGA数据下载分析
        2.2.2 蛋白样品制备
        2.2.3 免疫印迹实验(Western blotting)
        2.2.4 数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 TCGA临床数据
        2.3.2 CYLD在皮肤恶性黑色素瘤细胞中下调
    2.4 分析与讨论
第三章 CYLD对皮肤恶性黑色素瘤细胞的增殖与迁移影响
    3.1 实验材料与试剂
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 实验主要试剂配制方法
    3.2 实验方法
        3.2.1 黑色素瘤稳转细胞系的构建
        3.2.2 EdU法检测CYLD对皮肤恶性黑色素细胞增殖的影响
        3.2.3 细胞划痕实验检测CYLD对皮肤恶性黑色素瘤细胞迁移的影响
        3.2.4 蛋白样品制备
        3.2.5 免疫印迹实验(Western blotting)
        3.2.6 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 慢病毒感染实验结果
        3.3.2 CYLD对皮肤恶性黑色素瘤细胞增殖的影响
        3.3.3 CYLD对皮肤恶性黑色素瘤细胞迁移的影响
    3.4 分析与讨论
第四章 CYLD抑制黑色素瘤细胞增殖迁移的机制探讨
    4.1 实验材料与试剂
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验仪器
        4.1.3 实验试剂
        4.1.4 实验主要试剂配制方法
    4.2 实验方法
        4.2.1 蛋白样品制备
        4.2.2 免疫印迹实验(Western blotting)
        4.2.3 考马斯亮蓝染色
        4.2.4 免疫沉淀实验IP(Immunoprecipitation)
        4.2.5 载体构建
        4.2.6 数据分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 筛选与CYLD互作的蛋白
        4.3.2 载体构建与鉴定
        4.3.3 CYLD与 NPM互作
        4.3.4 CYLD降低NPM的泛素化水平
        4.3.5 CYLD调控黑色素瘤中PD-L1 的表达
    4.4 .分析与讨论
第五章 讨论与总结
    5.1 分析与讨论
    5.2 结论
引用文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]NPM1在结直肠癌的表达及临床价值[J]. 鄢超,毛瑞涛,马淑霞,宋丽娜,王玲玲,何成彦,杨光远,赵海丰.  标记免疫分析与临床. 2013(05)



本文编号：3183701