核心蛋白聚糖（decorin）缺失的肿瘤微环境与结直肠癌发生和转移机制研究
发布时间：2021-05-13 21:18
结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）是常见的恶性肿瘤之一。截止2015年,结直肠癌的新发病在我国例数达到37.63万人,死亡患者为19.10万人。越来越多的证据表明,结直肠癌的发生和发展是由于在微环境中转化细胞之间复杂的相互作用所造成的遗传和表观遗传改变。多基因、多因素、多分子信号参与的渐进性恶性积累过程是结直肠癌的发病机制。核心蛋白聚糖（decorin,DCN）是具有多种生物活性的细胞外基质重要组分之一。大量研究证实DCN在肿瘤发生发展中具有重要作用。越来越多的研究表明,作为肿瘤微环境的重要组分,DCN能够与多种因子或细胞膜受体相互作用,在肿瘤的发生及转移中发挥着重要作用,DCN很可能是一种肿瘤抑制因子,这也提示着蛋白核心聚糖有可能成为新的抗肿瘤药物。肿瘤发生过程中所在的内环境被称为肿瘤微环境。肿瘤微环境中的EMT（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是上皮性癌细胞获得恶性表型的一个重要机制。EMT发生期间,细胞粘附能力下降,上皮性状转换成间质性状,通过肿瘤微环境中癌细胞与基质细胞间活跃的相互作用促进恶性肿瘤侵袭与转移。结果表...
【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
0.1 结直肠癌(ColorectalCancer,CRC)
0.2 核心蛋白聚糖(decorin,DCN)
0.3 肿瘤微环境(Tumormicroenvironment)
0.4 EMT(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)
0.5 塞来昔布(Celecoxib)
0.6 研究目的及意义
第1章 建立AOM诱导DCN基因敲除型小鼠CRC模型,进行EMT发生机制研究
1.1 引言
1.2 实验材料
1.2.1 动物模型、生化试剂和耗材
1.2.2 主要仪器设备
1.2.3 试剂的配制
1.3 实验方法及步骤
1.3.1 野生型与DCN基因敲除型小鼠结直肠癌模型的构建
1.3.2 野生型与DCN基因敲除型小鼠肠上皮细胞的获取
1.3.3 小鼠肠上皮细胞蛋白质的提取
1.3.4 BCA法蛋白质浓度的测定
1.3.5 WesternBlot
1.3.6 肠组织RNA的提取及逆转录
1.3.7 引物设计及RT-qPCR
1.3.8 免疫组织化学(IHC)
1.4 实验结果与讨论
1.4.1 在野生型和DCN基因敲除小鼠中构建AOM诱导的结直肠癌模型
1.4.2 DCN的缺失在肿瘤微环境中促进EMT的发生
1.4.3 不同造模周期中DCN的缺失促进CRC的发生与转移
1.5 结论
第2章 体内DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤作用及机制研究
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 动物模型、生化试剂和耗材
2.2.2 主要仪器设备
2.2.3 试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 小鼠结直肠癌模型的构建及给药处理
2.3.2 肠上皮细胞蛋白质的提取
2.3.3 BCA法蛋白质浓度的测定
2.3.4 WesternBlot
2.3.5 免疫组织化学(IHC)
2.3.6 肠组织RNA的提取及逆转录
2.3.7 引物设计及RT-qPCR
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 构建AOM诱导的结直肠癌小鼠模型并进行药物处理
2.4.2 体内DCN与Celecoxib联合作用后显著抑制EMT进程
2.5 结论
第3章 体外DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤活性及机制研究
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 细胞株、生化试剂和耗材
3.2.2 主要仪器设备
3.2.3 试剂的配制
3.3 实验方法及步骤
3.3.0 SW480和LOVO细胞培养
3.3.1 MTT法检测细胞存活率
3.3.2 细胞划痕实验检测细胞迁移能力
3.3.3 平板克隆形成实验检测单个细胞集落形成能力
3.3.4 体外培养细胞总蛋白质的提取
3.3.5 BCA法蛋白质浓度的测定
3.3.6 WesternBlot
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 DCN与Celecoxib单独处理对结肠癌细胞增殖的影响
3.4.2 DCN单独或与Celecoxib联合处理对结肠癌细胞增殖的影响
3.4.3 DCN与Celecoxib联合作用后抑制结肠癌细胞迁移
3.4.4 DCN与Celecoxib联合作用后降低结肠癌细胞集落形成能力
3.4.5 体外DCN与Celecoxib联合作用后显著抑制EMT进程
3.4.6 DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤可能机制
3.5 结论
第4章 结论与展望
致谢
参考文献
攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况
本文编号：3184722
【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
0.1 结直肠癌(ColorectalCancer,CRC)
0.2 核心蛋白聚糖(decorin,DCN)
0.3 肿瘤微环境(Tumormicroenvironment)
0.4 EMT(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)
0.5 塞来昔布(Celecoxib)
0.6 研究目的及意义
第1章 建立AOM诱导DCN基因敲除型小鼠CRC模型,进行EMT发生机制研究
1.1 引言
1.2 实验材料
1.2.1 动物模型、生化试剂和耗材
1.2.2 主要仪器设备
1.2.3 试剂的配制
1.3 实验方法及步骤
1.3.1 野生型与DCN基因敲除型小鼠结直肠癌模型的构建
1.3.2 野生型与DCN基因敲除型小鼠肠上皮细胞的获取
1.3.3 小鼠肠上皮细胞蛋白质的提取
1.3.4 BCA法蛋白质浓度的测定
1.3.5 WesternBlot
1.3.6 肠组织RNA的提取及逆转录
1.3.7 引物设计及RT-qPCR
1.3.8 免疫组织化学(IHC)
1.4 实验结果与讨论
1.4.1 在野生型和DCN基因敲除小鼠中构建AOM诱导的结直肠癌模型
1.4.2 DCN的缺失在肿瘤微环境中促进EMT的发生
1.4.3 不同造模周期中DCN的缺失促进CRC的发生与转移
1.5 结论
第2章 体内DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤作用及机制研究
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 动物模型、生化试剂和耗材
2.2.2 主要仪器设备
2.2.3 试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 小鼠结直肠癌模型的构建及给药处理
2.3.2 肠上皮细胞蛋白质的提取
2.3.3 BCA法蛋白质浓度的测定
2.3.4 WesternBlot
2.3.5 免疫组织化学(IHC)
2.3.6 肠组织RNA的提取及逆转录
2.3.7 引物设计及RT-qPCR
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 构建AOM诱导的结直肠癌小鼠模型并进行药物处理
2.4.2 体内DCN与Celecoxib联合作用后显著抑制EMT进程
2.5 结论
第3章 体外DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤活性及机制研究
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 细胞株、生化试剂和耗材
3.2.2 主要仪器设备
3.2.3 试剂的配制
3.3 实验方法及步骤
3.3.0 SW480和LOVO细胞培养
3.3.1 MTT法检测细胞存活率
3.3.2 细胞划痕实验检测细胞迁移能力
3.3.3 平板克隆形成实验检测单个细胞集落形成能力
3.3.4 体外培养细胞总蛋白质的提取
3.3.5 BCA法蛋白质浓度的测定
3.3.6 WesternBlot
3.4 实验结果与讨论
3.4.1 DCN与Celecoxib单独处理对结肠癌细胞增殖的影响
3.4.2 DCN单独或与Celecoxib联合处理对结肠癌细胞增殖的影响
3.4.3 DCN与Celecoxib联合作用后抑制结肠癌细胞迁移
3.4.4 DCN与Celecoxib联合作用后降低结肠癌细胞集落形成能力
3.4.5 体外DCN与Celecoxib联合作用后显著抑制EMT进程
3.4.6 DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤可能机制
3.5 结论
第4章 结论与展望
致谢
参考文献
攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况
本文编号：3184722
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3184722.html
