重组溶瘤2型单纯疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立与验证

发布时间：2021-05-14 22:34

　　目的为了建立高效、敏感的针对重组溶瘤2型单纯疱疹病毒（oHSV2）的荧光定量PCR方法。方法依据oHSV2的基因序列,登录Beacon Designer 8.0软件设计引物,提取前期已重组好的阳性质粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,测定浓度并换算后梯度稀释为荧光定量PCR的模板,进行PCR反应。结果经过多次调整实验的反应条件和反应体系,熔解曲线为单一峰,该病毒与野生型Ⅰ型单纯疱疹病毒、野生型Ⅱ型单纯疱疹病毒等没有交叉反应。oHSV2最低检测限为1000 copies/μL,R²可达0.997,批内及批间变异系数分别为0.357%～1.156%和1.06%～3.35%,体液（血液）中预加的oHSV2的回收率为96.6%～109.3%。结论成功建立了oHSV2的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,可特异而灵敏地检测血浆中的oHSV2。 

【文章来源】：湖北科技学院学报(医学版). 2020,34(02)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌液及模拟临床样本
        1.1.2 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 引物的设计与合成
        1.2.2 质粒标准品的制备
        1.2.3 PCR方法的建立
            (1)SYBR Green荧光定量PCR反应体系的建立及优化
            (2)实时定量PCR标准曲线的建立
            (3)特异性试验
            (4)敏感性试验
            (5)重复性试验
            (6)荧光定量PCR检测方法的验证
2 结果与分析
    2.1 SYBR Green real-time PCR最佳反应条件与反应体系
    2.2 SYBR Green real-time PCR的建立
    2.3 SYBR Green real-time PCR的标准曲线
    2.4 荧光定量PCR方法的特异性结果
    2.5 荧光定量PCR方法的重复性评估
    2.6 验证结果
3 讨 论



本文编号：3186449