PTPRD在乳腺癌生物学行为及干细胞特性中的作用及机制的研究

发布时间：2021-05-26 12:25

　　乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,发病率居全世界女性恶性肿瘤的首位。乳腺癌目前的主要治疗手段是手术切除结合放化疗。但是仍然有部分肿瘤患者会出现肿瘤的复发和转移。乳腺癌的复发和转移是致乳腺癌死亡的最重要的原因。乳腺癌死亡的患者中,约90%的人死于肿瘤转移。肿瘤转移实际是多步骤多基因参与的过程。在肿瘤转移的过程中,肿瘤细胞往往发生上皮间质转化（EMT）。对肿瘤转移分子机制的研究有利于研发更有效的治疗手段。近年来,研究认为肿瘤干细胞在肿瘤复发和转移过程中起着重要的作用。肿瘤干细胞是肿瘤中一小部分具有干细胞特性的细胞,不仅能够自我更新也能够分化产生不同的子代,对比起肿瘤中非干细胞,具有强大的成瘤性。多种肿瘤中存在肿瘤干细胞,如肺癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、前列腺癌、肺癌等。乳腺癌干细胞是最早发现的实体瘤干细胞之一。CD44、CD24、乙醛脱氢酶1（Aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1）是乳腺癌干细胞最常用的标记分子。研究发现在乳腺癌中几百个Lin-CD44+CD24-/low的细胞即可在NOD/SCID小鼠中形成种植瘤,而上千个非Lin-CD44+CD24-/low细胞不能... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
第一部分 PTPRD下调对乳腺癌细胞增生、凋亡、迁移和侵袭的影响
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
            1.1 细胞株
            1.2 主要实验仪器及材料
            1.3 主要实验试剂
        2. 方法
            2.1 细胞培养及传代
            2.2 PTPRDsi RNA瞬转乳腺癌细胞
            2.3 CCK8增殖实验
            2.4 流式细胞仪检测细胞的凋亡和周期
            2.5 划痕实验
            2.6 Transwell迁移侵袭实验
            2.7 Western Blot
            2.8 统计学处理
    （三）结果
        1. PTPRD下调可以促进MDA-MB-231 细胞迁移和侵袭袭
        2. PTPRD siRNA抑制细胞凋亡
        3. PTPRD siRNA对增生、细胞周期的影响
        4. PTPRD siRNA对上皮间质转化的影响
    （四）讨论
    （五）结论
    （六）参考文献
第二部分 PTPRD与乳腺癌干细胞之间的关系及小鼠成瘤实验
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
            1.1 细胞系与实验动物
            1.2 主要实验仪器和试剂
        2. 方法
            2.1 乳腺球培养
            2.2 RNA抽提
            2.3 SYBRGreen染料法qRT-PCR
            2.4 细胞蛋白提取及定量
            2.5 Western Blot
            2.6 免疫荧光细胞化学
            2.7 克隆形成实验
            2.8 流式细胞技术检测CD44~+/CD24~-细胞比例
            2.9 磁珠分选CD44~+/CD24~-细胞群
            2.10 裸鼠种植瘤模型的建立
            2.11 组织包埋、切片
            2.12 HE染色
            2.13 组织蛋白的提取
            2.14 组织RNA提取
            2.15 免疫组织化学法
            2.16 统计学处理
    （三）结果
        1. PTPRD siRNA对CD44~+/CD24~-细胞群比例的影响
        2. PTPRD siRNA对乳腺癌细胞球形成能力的影响
        3. PTPRD siRNA对乳腺癌全克隆形成的影响
        4. PTPRD、STAT3、P-STAT3等在乳腺癌干细胞中的表达
        5. 免疫荧光法检测PTPRD在乳腺癌干细胞及非干细胞群的表达
        6. PTPRD下调对癌干细胞标记分子ALDH1及OCT-4 表达的影响
        7. PTPRDsiRNA对乳腺癌MDA-MB-231 细胞裸鼠种植瘤生长的抑制作用
    （四）讨论
    （五）结论
    （六）参考文献
第三部分 PTPRD作用的分子机制的探讨
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
        2. 方法
            2.1 IL-6 作用于细胞
            2.2 qRT-PCR
            2.3 Western Blot
            2.4 流式细胞仪检测细胞的凋亡
            2.5 划痕实验
            2.6 CCK-8 实验
            2.7 统计学处理
    （三）结果
        1. IL-6 可以促进细胞迁移，抑制凋亡
        2. IL-6 作用过程中PTPRD、P-STAT3，EMT相关蛋白及乳腺癌干细胞标记分子水平的变化
        3. PTPRD si RNA对STAT3表达和活化的影响
    （四）讨论
    （五）结论
    （六）参考文献
第四部分 PTPRD、P-STAT3在乳腺癌组织中的表达与临床病理特点和预后的关系
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
        2. 方法
            2.1 乳腺癌组织收集、临床病理参数收集及组织芯片的制作
            2.2 免疫组织化学法
            2.3 免疫组织化学结果判定
            2.4 临床病理资料收集及预后随访
            2.5 统计学处理
    （三）结果
        1. PTPRD、P-STAT3在乳腺癌及乳腺组织中的表达
        2. PTPRD、P-STAT3的表达与临床病理参数之间的关系
        3. PTPRD、P-STAT3的表达与预后之间的关系
    （四）讨论
    （五）结论
    （六）参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3206374