MYCN调控HES1通过凋亡途径参与小细胞肺癌化疗耐药的研究
发布时间：2021-06-08 06:36
研究背景肺癌是当今世界严重危害人类健康的恶性肿瘤,已成为我国癌症相关死亡的首要原因。小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）约占所有肺癌的13%-15%,具有高度侵袭性,生存期短,预后极差。尽管小细胞肺癌最初对化疗敏感,但大多数患者会迅速产生耐药性,从而导致化疗失败。因此,充分阐明小细胞肺癌耐药性的分子机制对于提高一线化疗疗效和延长患者的生存有至关重要的意义。研究目的课题组前期利用基因表达谱芯片比较分析小细胞肺癌耐药细胞（H69AR）和敏感细胞（H69）间基因表达差异,发现耐药细胞株中MYCN的表达显著高于敏感细胞株（2.3倍）,提示MYCN可能参与了 SCLC化疗耐药。本课题通过体外细胞和体内动物实验进一步明确MYCN在SCLC化疗耐药中的作用;通过转录组测序和生物信息分析寻找MYCN的下游信号分子,探讨MYCN参与SCLC化疗耐药的分子机制,为下一步开展逆转SCLC化疗耐药的研究提供实验依据。研究方法及结果1.MYCN与小细胞肺癌多药耐药相关（1）siRNA下调细胞中的MYCN,CCK8结果显示在MYCN下调的细胞中,化疗药物的IC50值明显降低,药物的...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ＭＹＣＮ在小细胞肺癌耐药细胞株Ｈ６９ＡＲ的表达增加??
?博士学位论文???我们选择了敏感株Ｈ６９及其对应的耐药株Ｈ６９ＡＲ，不表达ＭＹＣＮ的Ｈ４４６，以??及表达ＭＹＣＮ的Ｈ５２６进行后续的实验。我们随后在Ｈ６９ＡＲ细胞中进行了??ＭＹＣＮ的免疫荧光检测，发现其定位在细胞核（图１－２?Ｃ）。??Ａ?ＭＹＣＮ??Ｃ??ＧＡＰＤＨ?Ｈ６９ＡＲ??Ｈ４４６?Ｈ４４６ＤＤＰ?ＭＹ〇Ｎ?ＤＡＰＩ?ＭＥＲＧＥ??ｍｙｃｎ?丨鑛?ｍ??Ｈ６９?Ｈ６９ＡＲ?Ｈ４４６?Ｈ１４６?Ｈ５２６?Ｈ３４５?Ｈ２０９?Ｈ８２??图１－２?ＭＹＣＮ在小细胞肺癌细胞株中的表达情况??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?ＭＹＣＮ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＬＣ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ??（Ａ）小细胞肺癌敏感细胞株Ｈ４４６和耐药株Ｈ４４６ＤＤＰ中无ＭＹＣＮ的表达；（Ｂ）在８种小细胞??肺癌细胞株中，仅有Ｈ６９、Ｈ６９ＡＲ以及Ｈ５２６细胞表达ＭＹＣＮ；?（Ｃ）?Ｈ６９ＡＲ细胞的ＭＹＣＮ免??疫荧光实验显示ＭＹＣＮ定位在细胞核中。??３．体外细胞实验证实ＭＹＣＮ的表达与ＳＣＬＣ细胞的化疗耐药相关??３．１下调ＭＹＣＮ降低ＳＣＬＣ细胞的化疗抵抗??由吉玛公司设计合成三条Ｋ调ＭＹＣＮ的ｓｉＲＮＡ，按照说明书转染条件将??ｓｉＲＮＡ和ｓｉＮＣ转染进Ｈ６９ＡＲ细胞和Ｈ５２６细胞，４８ｈ提取总ＲＮＡ，?７２ｈ提取总??蛋白，根据ｑＲＴ－ＰＣＲ结果选取了两条下调效果较为明显的小干扰ＲＮＡ，?ｓｉｌｌ７０??（ｓｉＭＹＣＮ＃ｌ）和ｓｉｌ５７６?（ｓｉＭＹＣＮ＃２），序列见上述材料和方法部分。基因干扰??结果显示：与ｓｉＮＣ对比，ｓｉＭＹＣＮ组的ＭＹＣＮ显著下调，差异有统计学意义??（尸值＜０．００１）（图?１
?第一章ＭＹＣＮ调控凋亡途径影响小细胞肺癌的化疗耐药???ＡＢＣ??■?ｓｉＮＣ??１．５?ＳｔｌＫ?．Ｓ．ＮＣ?＾?＿?Ｓ１ＮＣ?Ｈ５２６??Ｚ?２：?ｉ?＾２?ＳＩＭＹ（Ｊ４＃１?￡３－＊?２０〇１?ｓｉＭＶＣＷｌ?ｔＳＴ１??ｉｑ．ｒ．?ｉｆｒ?ｎ?ｇ－＾Ｉｉ．??二一；晶?ｕ?ｌｉＬｌＥｊＪ．?ｌｉｉＬ－ＬｉｉＪ．??ＧＡＰＯＨ?垂？?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ１６?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ?１６??图１－３－１下调ＭＹＣＮ降低Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６细胞的化疗抵抗??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３－１?Ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｗｅｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｄｅｃｒｅａｓｅｄ?ａｆｔｅｒ?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｏｆ?ＭＹＣＮ?ｉｎ??Ｈ６９ＡＲ?ａｎｄ?Ｈ５２６?ｃｅｌｌｓ??（Ａ）ｑＲＴ－ＰＣＲ?和?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?结果显示：ｓｉＲＮＡ?干扰?Ｈ６９ＡＲ?和?Ｈ５２６?中?ＭＹＣＮ?的表达后，ＭＹＣＮ??的ｍＲＮＡ水平和蛋ｎ水平显著下降。（．Ｂ，Ｃ）ＣＣＫ８结果显示：在Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６中下调ＭＹＣＮ??的表达后，其［Ｃ５０值显著下降。＊，尸＜０．０５；?＊＊，Ｐ?＜?０．０１：?＊＊＊，尸＜?０．００１??３．２上调ＭＹＣＮ增加ＳＣＬＣ细胞的化疗抵抗??由苏州吉玛公司设计合成ＭＹＣＮ过表达质粒，质粒的构建详见材料和方法??部分。按照说明书转染条件将ＭＹＣＮ质粒和对应的ＮＣ质粒转染进Ｈ６９细胞和??Ｈ４４６细胞，４８ｈ提取总ＲＮＡ，７２ｈ提取总蛋白，ｑＲＴ－ＰＣＲ结果显示在Ｈ６９和??Ｈ４４６细胞中ＭＹＣＮ的ｍＲＮＡ水平显著增加，差异有统计学意义（？值＜?０．００１）??（图１－３－２?Ａ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
本文编号：3217869
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ＭＹＣＮ在小细胞肺癌耐药细胞株Ｈ６９ＡＲ的表达增加??
?博士学位论文???我们选择了敏感株Ｈ６９及其对应的耐药株Ｈ６９ＡＲ，不表达ＭＹＣＮ的Ｈ４４６，以??及表达ＭＹＣＮ的Ｈ５２６进行后续的实验。我们随后在Ｈ６９ＡＲ细胞中进行了??ＭＹＣＮ的免疫荧光检测，发现其定位在细胞核（图１－２?Ｃ）。??Ａ?ＭＹＣＮ??Ｃ??ＧＡＰＤＨ?Ｈ６９ＡＲ??Ｈ４４６?Ｈ４４６ＤＤＰ?ＭＹ〇Ｎ?ＤＡＰＩ?ＭＥＲＧＥ??ｍｙｃｎ?丨鑛?ｍ??Ｈ６９?Ｈ６９ＡＲ?Ｈ４４６?Ｈ１４６?Ｈ５２６?Ｈ３４５?Ｈ２０９?Ｈ８２??图１－２?ＭＹＣＮ在小细胞肺癌细胞株中的表达情况??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?ＭＹＣＮ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＬＣ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ??（Ａ）小细胞肺癌敏感细胞株Ｈ４４６和耐药株Ｈ４４６ＤＤＰ中无ＭＹＣＮ的表达；（Ｂ）在８种小细胞??肺癌细胞株中，仅有Ｈ６９、Ｈ６９ＡＲ以及Ｈ５２６细胞表达ＭＹＣＮ；?（Ｃ）?Ｈ６９ＡＲ细胞的ＭＹＣＮ免??疫荧光实验显示ＭＹＣＮ定位在细胞核中。??３．体外细胞实验证实ＭＹＣＮ的表达与ＳＣＬＣ细胞的化疗耐药相关??３．１下调ＭＹＣＮ降低ＳＣＬＣ细胞的化疗抵抗??由吉玛公司设计合成三条Ｋ调ＭＹＣＮ的ｓｉＲＮＡ，按照说明书转染条件将??ｓｉＲＮＡ和ｓｉＮＣ转染进Ｈ６９ＡＲ细胞和Ｈ５２６细胞，４８ｈ提取总ＲＮＡ，?７２ｈ提取总??蛋白，根据ｑＲＴ－ＰＣＲ结果选取了两条下调效果较为明显的小干扰ＲＮＡ，?ｓｉｌｌ７０??（ｓｉＭＹＣＮ＃ｌ）和ｓｉｌ５７６?（ｓｉＭＹＣＮ＃２），序列见上述材料和方法部分。基因干扰??结果显示：与ｓｉＮＣ对比，ｓｉＭＹＣＮ组的ＭＹＣＮ显著下调，差异有统计学意义??（尸值＜０．００１）（图?１
?第一章ＭＹＣＮ调控凋亡途径影响小细胞肺癌的化疗耐药???ＡＢＣ??■?ｓｉＮＣ??１．５?ＳｔｌＫ?．Ｓ．ＮＣ?＾?＿?Ｓ１ＮＣ?Ｈ５２６??Ｚ?２：?ｉ?＾２?ＳＩＭＹ（Ｊ４＃１?￡３－＊?２０〇１?ｓｉＭＶＣＷｌ?ｔＳＴ１??ｉｑ．ｒ．?ｉｆｒ?ｎ?ｇ－＾Ｉｉ．??二一；晶?ｕ?ｌｉＬｌＥｊＪ．?ｌｉｉＬ－ＬｉｉＪ．??ＧＡＰＯＨ?垂？?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ１６?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ?１６??图１－３－１下调ＭＹＣＮ降低Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６细胞的化疗抵抗??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３－１?Ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｗｅｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｄｅｃｒｅａｓｅｄ?ａｆｔｅｒ?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｏｆ?ＭＹＣＮ?ｉｎ??Ｈ６９ＡＲ?ａｎｄ?Ｈ５２６?ｃｅｌｌｓ??（Ａ）ｑＲＴ－ＰＣＲ?和?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?结果显示：ｓｉＲＮＡ?干扰?Ｈ６９ＡＲ?和?Ｈ５２６?中?ＭＹＣＮ?的表达后，ＭＹＣＮ??的ｍＲＮＡ水平和蛋ｎ水平显著下降。（．Ｂ，Ｃ）ＣＣＫ８结果显示：在Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６中下调ＭＹＣＮ??的表达后，其［Ｃ５０值显著下降。＊，尸＜０．０５；?＊＊，Ｐ?＜?０．０１：?＊＊＊，尸＜?０．００１??３．２上调ＭＹＣＮ增加ＳＣＬＣ细胞的化疗抵抗??由苏州吉玛公司设计合成ＭＹＣＮ过表达质粒，质粒的构建详见材料和方法??部分。按照说明书转染条件将ＭＹＣＮ质粒和对应的ＮＣ质粒转染进Ｈ６９细胞和??Ｈ４４６细胞，４８ｈ提取总ＲＮＡ，７２ｈ提取总蛋白，ｑＲＴ－ＰＣＲ结果显示在Ｈ６９和??Ｈ４４６细胞中ＭＹＣＮ的ｍＲＮＡ水平显著增加，差异有统计学意义（？值＜?０．００１）??（图１－３－２?Ａ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
本文编号：3217869
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